Kako izvesti analizo s PCR: opis postopka

Faringitis

Polimerazna verižna reakcija je znana že 30 let. Široko se uporablja na številnih področjih, od arheologije do genetike.

Metoda PCR pomaga vzpostaviti očetovstvo, najpogosteje pa se uporablja za identifikacijo različnih nalezljivih bolezni v človeškem telesu.

Kako poteka analiza PCR in kaj je to? Na ta vprašanja bomo poskušali odgovoriti podrobno.

PCR analiza - kaj je to?

Polimerna verižna reakcija (PCR) je zelo natančna metoda molekularne genetske diagnostike, ki omogoča odkrivanje različnih nalezljivih in dednih bolezni pri ljudeh, tako v akutnih kot tudi kroničnih fazah, in veliko pred pojavom bolezni.

Metoda PCR je popolnoma specifična in pravilno izvedena, ne more dati lažno pozitivnega rezultata. Če ni okužbe, analiza ne bo nikoli pokazala, kaj je. Zato je zdaj zelo pogosto za odobritev diagnoze uporabljena dodatna analiza PCR za določitev povzročitelja in njegove narave.

Polimerna verižna reakcija (PCR) leta 1983, ki jo je razvil Carey Mulllis (ZDA), za katero je leta 1993 prejel Nobelovo nagrado za kemijo.

Kakšna je prednost te metode?

Diagnoza s to metodo omogoča odkrivanje patogena neposredno v genu, ki ga vsebujejo snovi, ki se preučujejo. To je najbolj natančna analiza genitalnih okužb, skritih okužb, različnih spolno prenosljivih bolezni.

Razlike PCR diagnostike iz drugih metod laboratorijskih raziskav so naslednje:

  • metoda je namenjena identifikaciji samega patogena;
  • PCR diagnoza je univerzalna: za odkrivanje več patogenov;
  • bolezni je dovolj samo en biološki vzorec pacienta;
  • metoda je zelo občutljiva in ne spremljajo druge navzkrižne reakcije.

Prednost PCR diagnostike je tudi, da je za analizo primeren vsak biološki material pacienta: kri, izcedek iz genitalij, urin, seme.

Kakšne okužbe lahko odkrije razmaz na PCR?

V telesu je lahko prisotno veliko število patogenov, vključno s »skritimi«, ki se ne manifestirajo dolgo časa.

Analiza razmaza na PCR omogoča odkrivanje takih okužb:

Preskusni material za PCR je običajno sputum, slina, urin in kri. Pred analizo se morate za to skrbno pripraviti, potem ko ste se predhodno posvetovali z zdravnikom.

Krv za PCR se običajno daje na prazen želodec. Dobri rezultati kažejo analizo, ko je material za študijo vzet iz cervikalnega kanala ali sečnice. V tem primeru je PCR diagnostiko najbolje opraviti najkasneje en dan po spolnem odnosu.

Sorte PCR

PCR se uporablja na mnogih področjih za analizo in znanstvene eksperimente. Obstajajo različne metode analize:

  1. Reverzna transkripcija PCR (Reverzna transkripcija PCR, RT-PCR (angleščina)) se uporablja za amplificiranje, izolacijo ali identifikacijo znane sekvence iz RNA knjižnice.
  2. Obrnjen PCR (Inverzni PCR (eng.)) - se uporablja, če je v želenem zaporedju znana le majhna količina. Ta metoda je še posebej uporabna, kadar je potrebno določiti sosednje sekvence po vstavitvi DNA v genom.
  3. Nested PCR (Nested PCR) se uporablja za zmanjšanje števila reakcijskih stranskih produktov. Uporabimo dva para začetnih primerov in izvedemo dve zaporedni reakciji.
  4. Asimetrična PCR (Asimetrična PCR) se izvede, kadar je potrebno ojačati večinoma eno od verig izvirne DNA. Uporablja se v nekaterih sekvenčnih in hibridizacijskih testih.
  5. Kvantitativna PCR (kvantitativna PCR, Q-PCR (angl.)) Ali PCR v realnem času se uporablja za neposredno spremljanje merjenja količine specifičnega produkta PCR v vsakem reakcijskem ciklu.
  6. Korak PCR (Touchdown PCR (eng)) - z uporabo tega pristopa se zmanjša učinek nespecifične vezave začetnih oligonukleotidov.
  7. Skupina specifična PCR (skupinsko specifična PCR) - PCR za sorodne sekvence znotraj ene ali med različnimi vrstami, pri čemer se za te sekvence uporabljajo konzervativni primerji.

Če je nukleotidno zaporedje matriksa delno ali neznano, je mogoče uporabiti degenerirane primerje, katerih zaporedje vsebuje degenerirane položaje, v katerih se lahko nahajajo vse baze. Primerna zaporedje je lahko na primer:... ATH..., kjer je H A, T ali C.

Kateri biološki materiali se preiskujejo?

Material za študije PCR, v katerih je mogoče zaznati tujo bakterijsko DNA ali DNA ali RNA virusa, je lahko sestavljen iz različnih bioloških medijev in človeških tekočin:

  1. Urin. Uporablja se lahko za okužbo urogenitalnega trakta pri moških in sečil pri ženskah (pri moških uporaba urina kot material nadomešča epitelno strganje).
  2. Flegma. Uporablja se za diagnosticiranje tuberkuloze in manj pogosto za diagnosticiranje respiratornih oblik klamidije in mikoplazmoze. Sputum v količini 15-20 ml zberemo v sterilno (enkratno) steklenico.
  3. Biološke tekočine. Po indikacijah jemljejo sok prostate, plevralni, cerebrospinalni, amniotski, sklepni fluid, bronhoalveolarno izpiranje, slino.
  4. Epitelne ostanke sluznice. Pogosto se uporablja za diagnosticiranje spolno prenosljivih bolezni (spolno prenosljivih bolezni), kot so gonoreja, klamidija, mikoplazmoza, ureaplazmoza, trihomonijaza, gardnerellezis, herpetične in druge okužbe, ki vplivajo na sluznice.
  5. Biopsije. Najpogosteje uporabljene biopsije želodca in dvanajstnika za identifikacijo okužbe s Helicobacter pylori.
  6. Krv, plazma, serum. Uporablja se za PCR analizo virusov hepatitisa B, C, D, G, herpesa, CMV, HIV, človeških genov.

Kako se pripraviti na analizo?

Zanesljivost rezultata PCR je neposredno odvisna od pravilnosti dostave materiala za pregled. Material ne sme biti kontaminiran, sicer rezultat študije ne bo objektiven. Najpomembnejša priporočila pred predložitvijo analize PCR so naslednje zahteve:

  1. Urin se dostavi zjutraj v sterilni posodi.
  2. Zjutraj je treba na prazen želodec opraviti preiskavo krvi za okužbo.
  3. Dan pred analizo ni treba pokazati spolne aktivnosti.

Rezultat analize bo pripravljen v 1,5 do 2 dneh po postopku. Obstajajo takšne situacije, ko se lahko rezultat pripravi na isti dan.

Dekodiranje analize CRP

Proces interpretacije predstavljene raziskave se odlikuje po enostavnosti. Rezultate PCR analize lahko dobimo v 1,5-2x dneh po dobavi materiala. V nekaterih primerih je rezultat pripravljen že na prvi dan, in to lahko pomeni:

  • Negativen rezultat kaže, da okuženi povzročitelj manjka v diagnostičnem materialu.
  • Pcr pozitivno pomeni, da je DNA ali RNA patogena prisotna v človeškem telesu.

V nekaterih primerih se proizvede kvantitativna določitev mikroorganizmov. To še posebej velja za bolezni, ki jih povzročajo oportunistični mikroorganizmi. Ker te bakterije negativno vplivajo le na presežne količine.

Tudi kvantitativna analiza PCR je pomembna za izbiro terapevtske taktike in nadzor zdravljenja virusnih okužb, kot so virusi HIV in virusi hepatitisa.

Kako natančna je PCR diagnoza okužb?

Za metodo PCR je značilna visoka natančnost, specifičnost in občutljivost. To pomeni, da je ta analiza sposobna:

  • natančno določi prisotnost ali odsotnost okužbe;
  • natančno navedite, kakšno okužbo (specifičnost);
  • zaznava okužbo tudi z zelo nizko vsebnostjo DNA mikrobov v biološkem materialu,
  • ki je bila predmet raziskav (občutljivost).

Analiza PCR: cena in čas

Cena posamezne analize bo odvisna od okužbe, ki ste jo preverili. Približne cene in pogoji:

  1. STI: 300-500 rubljev, čas - 1 dan;
  2. Epstein-Barr virus, humani papiloma virus, herpes virus, citomegalovirus: 300-500 rubljev, izrazi - 1 dan;
  3. Hepatitis A, B, C, D, G: kvalitativna analiza 650 rubljev, kvantitativna analiza 2000 rubljev. Pogoji - do 5 dni;
  4. Protitelesa proti virusu hepatitisa C, skupaj (Anti-HCV) - 420 rubljev;
  5. Protitelesa proti virusu hepatitisa C, IgM (Anti-HCV IgM) - 420 rubljev;
  6. Helicobacter pylori (Helicobacter pylori): 300-400 rubljev, izraz - 1 dan;
  7. HIV (protitelesa in antigeni) - 380 rubljev;
  8. HIV RNA, kvalitativno - 3.500 rubljev;
  9. HIV RNA, količinsko - 11.000 rubljev.

Če želite prihraniti denar, lahko izberete fiksno serijo analiz. To storitev zagotavlja večina klinik, kjer je mogoče analizo opraviti po metodi ERP (invitro, onclinics, itd.).

PCR diagnoza tuberkuloze

Tuberkuloza je specifična okužba, njen poudarek je lahko v človeških tkivih več let, nato pa se razširi več mesecev. To je kronična bolezen, katere optimalne sheme zdravljenja je težko izbrati. Eden od razlogov za to je pozna diagnoza, ko so se mikobakterije v človeškem telesu že prilagodile številnim zdravilom.

Katere sodobne metode diagnoze obstajajo? PCR diagnostika - kaj je to? Kako poteka ta raziskava? V katerih primerih je tuberkuloza diagnosticirana s to metodo in kaj je njeno bistvo?

Kaj je PCR diagnostika

To je ena od najsodobnejših metod diagnosticiranja ne le bolezni, ampak tudi odkrivanje biološkega materiala. PCR diagnostika je bila odkrita relativno pred kratkim. Pred približno tridesetimi leti, leta 1983, je ameriški biokemik, Carey Banks Mullis, predlagal kompleksno obnovitev biološkega materiala mikroorganizmov v enem kratkem segmentu. Zahvaljujoč njegovemu odkritju je znanstvenik prejel najvišjo nagrado - Nobelovo nagrado.

Kaj je to - PCR diagnosticiranje okužb? Polimerna verižna reakcija (PCR) je diagnoza odkrivanja virusnih bolezni, ki temelji na metodah genskega inženiringa. Široko se uporablja v medicinski mikrobiologiji, imunologiji in virologiji. Metoda je univerzalna in pomaga pri postavitvi diagnoze z majhno količino materiala. Okužbo je mogoče zaznati dobesedno v prvih urah okužbe z njim, še preden se pojavijo prvi simptomi bolezni.

Metoda je sestavljena iz pridobivanja iz materiala bolne osebe ne samega patogena, temveč fragmentov genoma (delcev DNA), njegove biosinteze z naknadnim določanjem, v kateri razred mikroorganizmov spada genski material z molekularno genetskimi metodami.

Kljub temu, da je to zapleten proces, je potrebnih veliko manj časa kot mnogi biološki načini odkrivanja povzročiteljev infekcij. V samo nekaj urah lahko mikroorganizem odkrijemo s PCR. Da bi to dosegli, ga ni treba izolirati od okolja (krvi, cerebrospinalne tekočine, izpljunka) in ga dolgo časa gojiti na umetnih hranilnih medijih. Dovolj je, da je v preučevanem materialu prisoten majhen fragment DNA verige infekcijskega povzročitelja.

Osnova reakcije je možnost, da se pri umetnih pogojih (in vitro) ustvari sinteza molekul nukleinskih kislin infekcijskega povzročitelja.

Kaj je potrebno za PCR?

  1. Prajmerji so segmenti DNA, iz katerih se začne biosinteza ali ustvarjanje.
  2. Nukleotidi ali kompleksne spojine, ki so osnova molekule DNA ali RNA.
  3. Polimerazna verižna reakcija je nemogoča brez prisotnosti polimeraze, ki je encim, ki pospešuje PCR.

Faze diagnostike PCR

Kako se molekularna diagnostika izvede s PCR? Postopek je preprost in traja kratek čas ob upoštevanju zbiranja materiala.

  1. Pred začetkom študije vzamejo potrebni biološki material - to je bronhialna pralna voda, kri, želodčna vsebina, sputum. Vrsta biološkega materiala je odvisna od domnevnega patogena.
  2. Denaturacija ali uničenje primarne strukture DNA, ki je sestavljena iz dveh verig. Bistvo te faze je ločiti dve verigi pod vplivom visoke temperature (maksimum je 98 ° C, ki traja največ dve minuti).
  3. V naslednjem koraku PCR, imenovanem žarjenje, se temperatura zniža za nekaj stopinj, tako da se bo premaz vezal na verigo DNA.
  4. Raztezek, med katerim poteka sinteza želenih molekul neposredno.

Posledično samo 25-30 takih ciklov prejme potrebno število kopij DNA mikroorganizmov, ki jih je enostavno prepoznati.

Ali PCR zahteva diagnozo tuberkuloze?

Absolutno vseh oseb s sumom na tuberkulozo ni mogoče izvajati PCR, ker metoda zahteva drago opremo. Vse javne klinike si ne morejo privoščiti. Poleg tega se je zgodilo, da se običajne metode diagnosticiranja okužbe v večini primerov prav tako upravičujejo.

Te vključujejo:

  • anketa bolnikov, zgodovina;
  • popoln pregled osebe;
  • študijo z Mantoux tuberkulinskim testom;
  • radiografija ali fluorografija;
  • po potrebi računalniška diagnostika;
  • mikrobiološke metode raziskovanja: mikroskopija po razmazu in bakteriološka preiskava izpljunka.

PCR za tuberkulozo se izvaja v posebnih primerih, ko je težko postaviti diagnozo ali pa ni mogoče izvesti drugih instrumentalnih metod.

Kljub obilici diagnostičnih metod se pojavnost tuberkuloze še naprej povečuje. Trenutno ni le njena rast, temveč tudi druge značilnosti:

  • bolezen se pogosto pojavi v hudi obliki;
  • povečuje se število smrtnih primerov;
  • vedno bolj odporni na sodobno kemoterapijo so diagnosticirane oblike bolezni.

Nerazumljivost ljudi, da se vsako leto redno zdravniško pregledajo, zavračanje cepljenja vodi do širjenja tuberkuloze. V takih razmerah potrebujemo hitre, informativne in učinkovite raziskovalne metode, ki bi morale biti dostopne otrokom in odraslim. Vse zgoraj navedene diagnostične metode so veliko slabše od PCR.

Koristi diagnosticiranja tuberkuloze s PCR

Ta raziskava, čeprav nova, se je dobro izkazala, zlasti v spornih primerih, kjer ni mogoče postaviti diagnoze iz več razlogov.

Zahvaljujoč PCR je veliko lažje odkriti povzročitelja tuberkuloze v testnem materialu.

Prednosti PCR diagnostike so naslednje.

  1. To je hitra analiza. Majhen fragment molekule DNA lahko uporabimo za diagnozo v samo nekaj urah (približno pet), ki se uspešno uporablja v nujnih primerih, ko je na primer pred operacijo potrebno ugotoviti, ali je oseba bolna s tuberkulozo.
  2. Analiza PCR je dovoljena v primeru, ko druge metode niso na voljo ali prepovedane (za odkrivanje pljučne tuberkuloze, včasih je potrebno vzeti več radiografskih slik, ki bodo velike doze sevanja).
  3. S pomočjo PCR se v vsakem biološkem okolju preveri prisotnost patogena v njem. Na primer, lahko izvedete študijo cerebrospinalne tekočine, če obstaja sum na tuberkulozni meningitis.
  4. Dovoljena je PCR diagnoza nalezljivih bolezni pri otrocih, ker je metoda varna.
  5. Omogoča identifikacijo patogena na kateri koli stopnji bolezni.
  6. Visoka občutljivost PCR omogoča odkrivanje Mycobacterium tuberculosis, čeprav je v biološkem materialu le nekaj mikroorganizmov.
  7. Dobro je opraviti diagnozo ponovitve bolezni.

Po vsem prebranem PCR-ju se zdi skoraj popolna diagnostična metoda, ki naj bi vsakdo z sumom na tuberkulozo. Vendar pa obstajajo tudi slabosti, ki jih je treba upoštevati.

Pomanjkljivosti PCR pri diagnozi tuberkuloze

V našem času je takšna diagnostika redkejša od pravilnosti. In za to obstaja razlog.

  1. To je draga raziskovalna metoda. V mnogih klinikah je oprema za PCR odsotna zaradi visokih stroškov, vendar je analizo mogoče opraviti v plačanih laboratorijih.
  2. Takoj po zdravljenju so lahko v človeškem telesu še vedno prisotne mrtve mikobakterije ali življenje v majhnih količinah (rezultat bo pozitiven med diagnosticiranjem PCR), zato bo metoda v tem času nezanesljiva, ni smiselno, da jo izvajamo.
  3. Mutacije mikobakterij povzročajo neučinkovito PCR - normalne sekvence DNA ni mogoče sintetizirati.
  4. Treba je izbrati pravo okolje za študijo, kri se vzame le, če obstaja sum, da je okužena (sepsa), ni potrebe po jemanju izpljunka, če obstaja vprašanje tuberkuloze organov živčevja. V tem primeru PCR ne bo mogel odkriti patogena in diagnoza bo neinformativna.

Indikacije za odkrivanje tuberkuloze z analizo PCR

PCR diagnoza tuberkuloze se najpogosteje izvaja v spornih primerih. Kdaj zdravniki napotujejo na to študijo?

  1. Če je težko postaviti diagnozo z običajnimi razpoložljivimi metodami, pa je prišlo do stika z bolnikom s tuberkulozo.
  2. V primeru, ko oseba ne more biti dostavljena na kliniko, da bi opravila rutinske rutinske teste za tuberkulozo, je lažje pregledati z uporabo PCR, ker se lahko sputum za test prenese v kozarec in diagnoza potrdi v nekaj urah.
  3. Če bo oseba opravila nujno operacijo in je nujno ugotoviti, ali je bolan s tuberkulozo.
  4. Če je potrebno, je nosečnica bolje preiskati tudi tuberkulozo z uporabo PCR, ker je metoda varna.
  5. Vsakdo, ki ni bil diagnosticiran s tuberkulozo, je bil potrjen z bakteriološkimi metodami in fluoroskopijo. To se zgodi, ko je lezija v pljučih neopazna v neposredni podobi, in oseba, ki je med spravljanjem izpljunka za študijo, ne more slediti priporočilom za pravilno zbiranje materiala. V tem primeru je oseba zaskrbljena zaradi vseh simptomov, značilnih za pljučno tuberkulozo.
  6. Če obstajajo dvomi o rezultatih testa Mantoux.
  7. Pri otrocih je priporočljivo opraviti PCR diagnozo tuberkuloze. Postopek je varen, ne povzroča dodatne izpostavljenosti sevanju in je učinkovit pri odkrivanju težko diagnosticiranih oblik bolezni.

Pravočasna diagnoza tuberkuloze je ključna za pravilno predpisano zdravljenje in zmanjšanje širjenja bolezni. Pogosto znane metode odkrivanja bolezni niso vedno učinkovite. Zato je PCR danes eden najbolj zanesljivih in varnih načinov za odkrivanje okužb v zgodnjih fazah njegovega razvoja.

PCR analiza

PCR (verižna reakcija s polimerazo) je daleč najhitrejša in najbolj zanesljiva metoda za diagnosticiranje nalezljivih bolezni.

Princip metode polimerazne verižne reakcije je razvil Kary Mullis leta 1983. Za svoje odkritje je K. Mullis leta 1993 prejel Nobelovo nagrado za kemijo.

Metoda PCR omogoča, da dosežemo znatno povečanje majhnih koncentracij določenih fragmentov nukleinskih kislin (DNA) v biološkem materialu (vzorec). Metoda temelji na večkratnem selektivnem kopiranju (ojačanju) določenega dela DNK z uporabo encimov v umetnih pogojih.

Prednosti PCR diagnostične metode kot diagnostične metode za infekcijske bolezni

Neposredno odkrivanje patogenov

Številne tradicionalne diagnostične metode, kot so encimski imunski testi, odkrivajo beljakovinske označevalce, ki so produkti vitalne aktivnosti infekcijskih povzročiteljev, kar daje le posredne dokaze o prisotnosti okužbe. Identifikacija specifične regije DNA patogena po metodi PCR neposredno kaže na prisotnost patogena.

Visoka specifičnost

Visoka specifičnost metode PCR je posledica dejstva, da je v preučevanem materialu odkrit edinstven fragment DNA. Specifičnost je določena z nukleotidnim zaporedjem primerjev, ki izključuje možnost pridobitve napačnih rezultatov, v nasprotju z imunološkimi analiznimi metodami, kjer so pogoste napake v povezavi s križnimi reakcijskimi antigeni.

Visoka občutljivost

Metoda PCR omogoča odkrivanje celo posameznih celic bakterij ali virusov. Analiza PCR razkriva prisotnost patogenov nalezljivih bolezni v primerih, ko drugih metod (imunološki, bakteriološki, mikroskopski) to ne more storiti. Občutljivost analize PCR je 10-100 celic na vzorec (občutljivost imunoloških in mikroskopskih testov je 103-105 celic).

Univerzalnost postopka za odkrivanje različnih patogenov

Material za študijo s PCR je DNA patogena. Metoda temelji na odkrivanju fragmenta DNA ali RNA, ki je specifičen za določen organizem. Podobnost kemijske sestave vseh nukleinskih kislin omogoča uporabo enotnih metod laboratorijskih raziskav. To omogoča diagnozo več patogenov iz enega samega biološkega testa.

Visoka stopnja rezultatov analize

Za analizo PCR ni potrebna izolacija in gojenje kulture patogena, kar zahteva veliko časa. Poenotena metoda predelave biomateriala in detekcija reakcijskih produktov ter avtomatizacija postopka pomnoževanja omogočata izvedbo popolne analize v 4-5 urah.

Sposobnost diagnosticiranja ne samo akutnih, ampak tudi latentnih okužb

Metoda PCR je še posebej učinkovita pri diagnosticiranju težko gojenih, neobdelanih in obstojnih oblik mikroorganizmov, ki se pogosto pojavljajo pri latentnih in kroničnih okužbah, saj se s to metodo izognemo težavam, ki so povezane z rastjo takšnih mikroorganizmov v laboratoriju. Uporaba PCR diagnostike je prav tako zelo učinkovita pri patogenih z visoko antigensko variabilnostjo in znotrajceličnimi paraziti.

Kako učinkovito je testiranje sputuma za tuberkulozo s PCR?

Za identifikacijo kohovih palic pri ljudeh se uporabljajo različne diagnostične metode. Zahvaljujoč njemu se patologija lahko odkrije tudi v začetni fazi, kar povečuje bolnikove možnosti za okrevanje. Analiza sputuma za tuberkulozo je tehnika, ki je najbolj cenjena in zelo učinkovita. Kaj je to in koliko stane takšna analiza?

Kakšna je analiza sputuma s PCR?

PCR pomeni polimerazno verižno reakcijo. Ta metoda je učinkovita proti nalezljivim boleznim. Za vzpostavitev jasne diagnoze, vam ni treba zbrati veliko količino biomateriala in čakati dolgo časa, kot v primeru setev izpljunka.

Metoda temelji na pridobivanju DNK delcev mikroorganizmov. Nadalje, molekularno genetske raziskave bodo določile, katera vrsta mikroorganizmov naj vključuje razpoložljivi material. V pogojih testne epruvete bo specialist sintetiziral bakterijske molekule in v nekaj urah naredil ustrezne zaključke.

Učinkovitost

Analiza sputuma za Mycobacterium tuberculosis je učinkovita, ko je Kochova palica udarila v dihalni sistem. V tem primeru se lahko bolezen zlahka prepozna, tudi v prvih urah infekcije.

Vendar pa analiza sputuma ne bo pokazala zanesljivega rezultata, če je prisotna tuberkuloza:

  • kosti;
  • možgani, hrbtenjača;
  • živčni sistem;
  • spoji itd.

Fthizatricar bo lahko določil vrsto bolezni, pri čemer bo upošteval sedanje simptome in se opiral na rezultate splošnih in drugih analiz.

Prav tako je neprimerno za takšno metodo raziskav v primeru, ko morate opraviti kontrolno analizo po terapevtskem zdravljenju bolezni. Rezultat bo pozitiven, kot v telesu, v vsakem primeru pa še vedno živi ali mrtvi IBC. Bolje je dati prednost drugemu diagnostičnemu postopku.

Kontraindikacije za metodo

Kot taka ni kontraindikacij za testiranje sputuma na tuberkulozo z uporabo PCR. Obstajajo omejitve. Kot je bilo omenjeno zgoraj, ni potrebe, da bi ga izvajali po zdravljenju tuberkuloze. Rezultati ne bodo koristni. Tukaj je zaželeno uporabiti drugačno diagnozo.

Poleg tega za to diagnozo ni drugih ovir. Sputum je mogoče pregledati v vseh starostnih skupinah in pri vseh povezanih boleznih. Tudi če ni spontanega sproščanja izpljunka, lahko analizo opravimo z jemanjem sluzi z uporabo bronhoskopije.

Koristi

V tej metodi, masa pluse, ti vključujejo:

  1. Visoka specifičnost in občutljivost. Ugotovili so le povzročitelja tuberkuloze. Ne more biti nobenega napačnega odgovora, če se upoštevajo vse nianse postopka. Mikobakterije se odkrijejo tudi pri najmanjšem številu. Tudi če je v zbranem materialu 10 nenormalnih celic, bo okužba zaznana.
  2. Hitrost odgovora. Koliko analiz je opravljenih? Po 3-5 urah dobite rezultat. Za tuberkulozo ni potrebe po kulturi sputuma, kar skrajša čas.
  3. Lahko prepoznate kot skrito okužbo in tisto, ki je v akutni obliki.
  4. Absolutnih kontraindikacij ni. To omogoča, da se postopek izvede za vse brez izjeme (tudi za majhne otroke), še posebej, kadar so druge metode nerešene.
  5. S pomočjo PCR diagnostike preučujemo različne biomateriale (urin, blato, kri, slino, cerebrospinalno tekočino itd.).
  6. Metoda razkriva tuberkulozo v zgodnjih fazah, v prvih urah po okužbi.
v vsebino

Slabosti

Poleg pozitivnih strani obstajajo tudi negativni. To je:

  1. PCR analiza je drag "užitek". Poleg tega oprema, potrebna za njeno izvajanje, ni na voljo v vseh zdravstvenih centrih. V klinikah je le redko prisotna, saj je tudi njena vrednost velika. Če govorimo o zasebnih klinikah, potem, da, lahko najdete takšno diagnozo. Dovolite sebi, žal, ne more vsakdo.
  2. Pokaže lažno pozitivne rezultate pri tistih ljudeh, ki so pred kratkim opravili zdravljenje tuberkuloze.
  3. Če je mutacija MBC, lahko metoda daje tudi napačne rezultate.
  4. V primeru nepravilnega zbiranja gradiva ali nezadostne usposobljenosti strokovnjaka, ki vodi raziskavo, je možna tudi napaka. V nekaterih primerih je treba postopek ponoviti večkrat in vsakič, ko se plačilo ponovi.
v vsebino

Priprava na analizo

Da bi bil material visoke kakovosti, ga je treba pravilno sestaviti in ga ustrezno pripraviti.

Obstajajo nekatera pravila za zbiranje sputuma za tuberkulozo. Algoritem dejanja je naslednji:

  1. Tudi na predvečer mora oseba piti izkašljevanje (če se sputum slabo premakne). Tudi če to ni pomagalo, je treba inhalacijo izvesti na podlagi zdravil za razredčenje in izkašljevanje. V odsotnosti izpljunka je bolnik usmerjen v bronhoskopijo. V tem postopku se vzame material za študijo.
  2. Vnaprej kupite posebno posodo. Je sterilen in neprepusten za zrak, tako da ni mogoče ničesar dodatno postaviti, kot tudi vnaprej.
  3. Prostor, v katerem se zbira izpljunek, mora biti dobro prezračen. Treba je odpreti okna, vrata, vklopiti pokrov. Še ena dobra možnost je, da se osvežite s svežim zrakom (na primer na balkon ali na dvorišče).
  4. Tik pred postopkom morate vse opozoriti, da v prostor ne bo nikogar, kjer se bo vse zgodilo. V biomaterialu ne bi smelo biti dodatnih mikrodelcev - to je pomembno.
  5. Jedo pred obiranjem ni priporočljivo.
  6. Izpiranje ust in grla.
  7. Slina se izpljune. Njena zmogljivost bi morala biti minimalna.
  8. S kašljem oseba vzame sluz in jo pljune v pripravljeno posodo. Po postopku zaprite pokrov in vzemite vzorec v laboratorij.

Kako zbrati izpljunek naj povem zdravniku. Če si bolnik tega ne upa sam, potem se zdravstveni delavci rešijo. Med manipulacijo oblečejo posebno zaščitno masko. Zberemo izpljunek v posebnem prostoru, kjer za tujce ni poti. Če pacient ne more priti na kliniko, pride specialist v njegovo hišo in pomaga zbirati sluz.

Če je bronhoskopija opravljena, se bolniku vstavi v sapnik z napravo - bronhoskopom. Z njegovo pomočjo se gradivo odvzame.

Za zanesljivost je priporočljivo trikrat opraviti analizo, in sicer:

  • zjutraj na prazen želodec;
  • po prvem času po 4-5 urah;
  • 24 ur po prvi študiji in tudi pred obroki.
v vsebino

Kako poteka ta analiza?

Preizkus testa za sputum za tuberkulozo je le del dela. Glavni naprej. Veliko je odvisno od tega, kako pripravljen specialist.

Potek študije je naslednji:

  1. Specialist nadaljuje z uničenjem primarne strukture DNA (denaturacija). Tu sta dve verigi. Pri visokih temperaturah so ločene.
  2. Na naslednji stopnji se temperatura zmanjša (žarimo). To je potrebno za povezavo verige DNA s primerjem.
  3. Tretja stopnja je raztezek. Tu se sintetizirajo potrebne molekule.
v vsebino

Rezultati dekodiranja

Mycobacterium tuberculosis v sputumu s PCR se lahko odkrije ali ne. Pozitiven rezultat temelji na dejstvu, da je v biomaterialu prisotna Kochova palica. To pomeni, da je oseba okužena. Z negativno - 98% dejstva, da subjekt ni okužen.

Kazalnike je mogoče oceniti na:

  • katera faza patologije (latentna ali aktivna);
  • koliko je telo prizadeto;
  • ali je izbrana obravnava učinkovita v določenem primeru.

Ne pozabite, da nič ni temeljito. Zato lahko pride do lažno pozitivnega ali lažno negativnega rezultata. Da bi zagotovili njegovo pravilnost, priporočamo druge diagnostične postopke ali PCR dvakrat (trikrat).

Analiza stroškov v različnih centrih

V različnih klinikah lahko daste sputum za PCR. Naj navedemo primere številnih priljubljenih moskovskih središč s cenovno politiko.

Metode za testiranje sputuma za tuberkulozo

Analiza sputuma za tuberkulozo je vključena v sklop diagnostičnih ukrepov, ki so potrebni za identifikacijo in pojasnitev diagnoze. Vsebnost sputuma bo pripomogla k ustreznemu režimu zdravljenja.

Kako opraviti test za sputum za tuberkulozo

Zdravniki so razvili pravila za analizo. Slina se zbira zjutraj, preden oseba zajtrkuje. Najprej pacient izvaja higienske postopke:

  • čiščenje zobne sklenine;
  • temeljito izpiranje s čisto vodo ustne votline in žrela.

Nato se začne takojšnja dostava materiala za analizo. Kako opraviti test za sputum? Zahteve za postopek: t

  1. Priprava se začne vnaprej, zvečer. Bolnika spodbujamo k jemanju posebnih zdravil, ki bodo naredila pljučno izločanje bolj naravno. To so ekspektoranti in redčila. Če takšni postopki ne pomagajo, izvedite inhalacijo s farmacevtskim sestavkom za izkašljevanje.
  2. Pripravite posodice za sputum. Sluz je treba zbrati v steriliziranih posodah in tesno zapreti.
  3. Pred dostavo kašelj in pljuvati v posodo. Volumen sline ne sme biti velik, zato je iz grla potrebno sputum. Bakterije ustne votline so v analizi nepomembne.
  4. V prostoru z odličnim prezračevanjem zberite slino. Analizo izvedemo tako, da odpremo krmo, ki teče s pokrovom. Priporočljivo je odpreti okna ali oditi na svež zrak.

Med postopkom v prostoru je prepovedano vstopiti. Zunanji sodelavci lahko prispevajo k mikroflori pisarne in s tem k sputumu, patološkim tvorbam. Zdravstveni delavci prejmejo analizo v posebni maski (respirator).

Analiza sputuma za transkript tuberkuloze

Dekodiranje se začne z gledanjem videza sluzi. Patologija označuje spremembo barve - postane temna, z vidnimi primesmi krvi. Barva ni glavni indikator. Sputum postane temen od pitja rdečega vina, strasti kave. Nekatera zdravila in barvne pijače spreminjajo videz sluzi.

Zbrano gradivo je dešifrirano po dveh kazalnikih, kar pomeni, da zdravniki dobita dva rezultata:

Pozitiven odgovor

Analiza nastalega izpljunka potrjuje prisotnost bolezni v telesu. To potrjuje to:

  • tujki ali neznani vključki;
  • prisotnost strdkov sluzi;
  • vidne proge;
  • neprijeten gnojni ali infekcijski vonj;
  • gnoj.

Makroskopska raziskovalna metoda zagotavlja druge podatke:

  • fibrinoznih zvitkov;
  • Kohovi formaciji za palice za leče;
  • izdelki iz razkroja bakterijskih snovi;
  • ostanki patološkega procesa v pljučnem tkivu.

Pozitiven rezultat razkriva povečano količino beljakovinskih spojin. Doseže 100-120 g / l.

Druga mikroskopska metoda omogoča identifikacijo drugih nevarnih elementov:

  • alveolarni makrofagi;
  • precenjena sestava levkocitov;
  • visoka stopnja limfocitov.

Za tuberkulozo človek pogosto poskuša izpljuniti iz ust. Hemoptiza poveča nastanek rdečih krvnih celic. Volumen sline v ustih je tak, da ga oseba ne more pogoltniti, ne da bi opazila. Njegova več kot v zdravem stanju.

Negativen odgovor

Študija kaže, da je število levkocitov majhno, ustreza normi. Mikrobakterij prav tako niso zaznane. Če se pacient ne počuti zdravo, bo specialist predpisal dodatni pregled. Možno je, da je bolezen povezana s pljučno boleznijo. Vrste in metode dodatne diagnostike so odvisne od simptomov in stanja bolnika.

Kako je študija sluzi

Tuberkuloza je nevaren patološki učinek na pljučno tkivo, opazen je njihov razpad. Analiza se izvede z več metodami. Najpogostejši - ELISA (imunoanaliza). Bistvo metode:

  1. Protitelesa dodamo k raztopini, v kateri je nameščen del izpljunka.
  2. Preverite koncentracijo antigenov v primerjavi z normo zdravega telesa.
  3. Določite aktivnost patološkega okolja.
  4. Diagnosticirati.

Druga različica laboratorijskih raziskav je ODPADKI. Za metodo vzemite posebno medicinsko opremo. Bistvo raziskave strojne opreme:

  1. V mikroskopskem okolju, ki je bilo vbrizgano v izpljunku za predvideno vrsto okužbe.
  2. Aparat začne rasti pri določenih temperaturah bakterij.
  3. V procesu nastaja ogljikov dioksid, senzorji pa ga dvignejo.
  4. Plin se združuje z barvilom.
  5. Na indeksu fluorescence naredimo zaključke o vrsti bolezni.

Najlažje je kulturno. Flegma, posejana v posebnem okolju. Zdravnik pregleda vrste kolonij mikrobnih formacij. Metoda je najdaljša, vendar vam omogoča, da dokažete diagnozo. Uporablja se zelo redko, ravno zaradi dolgega obdobja, ki ni vedno primerno za bolnika.

Analiza sputum pcr za tuberkulozo

PCR je okrajšava za medicinski izraz verižna reakcija polimeraze. Diagnostika je eden najnovejših dosežkov znanstvenikov. Odprta je bila leta 1983, pomembnost odkritja je cenjena na svetu, znanstvenik je prejel najvišje priznanje - Nobelovo nagrado.

Metoda temelji na uporabi genskega inženiringa. Njegova vsestranskost zahteva majhno količino materiala za natančno diagnozo. Prepoznavanje okužbe s tuberkulozo je resnično v zgodnjih urah okužbe, brez čakanja na razvoj bolezni.

Bistvo metode, ki je polimeraza:

  • pacient vzame fragment DNA delcev;
  • vodenje biološke sinteze materiala;
  • določen z razredom mikroorganizmov.

Postopek je tehnološko zapleten, vključuje molekularno genetsko preiskavo. PCR za tuberkulozo traja dobesedno nekaj ur. Čas, ki je potreben za druge metode, ni mogoče primerjati z njim v hitrosti. Po opravljeni analizi pacient čaka na odkrivanje povzročitelja. Proces, ki temelji le na strokovnjaku, lahko razume. Navadna oseba ne razume zamotanosti metode.

Kako je postavljena diagnoza tuberkuloznih testov:

  1. Vzemite potreben material za analizo. Kaj bi lahko bilo: kri, želodec, izpljunek, voda, oprana z bronhi.
  2. Vrsta materiala se izbere glede na vrsto patogena, ki je možna okužba.
  3. Naslednji korak je preučevanje verižne povezave. Dve verigi sta izpostavljeni visokim temperaturam do 98 stopinj. Stopnja se imenuje denaturacija (uničenje strukturne verige DNA). Čas izpostavljenosti temperature - do 2 minuti.
  4. Naslednja faza je žarjenje. Temperatura se zniža, primer se dovoli, da se poveže z verigo DNA.
  5. Posledično pride do raztezka - sinteze molekul, potrebnih za ta proces.

Za takšno analizo je potrebna posebna oprema. To je drago, zato ni na voljo v nobeni zdravstveni ustanovi. PCR se izvaja v težkih primerih, ko ni pravilnega rezultata običajnih diagnostičnih metod, je nemogoče izvesti instrumentalne metode preverjanja bolnikovega stanja.

Prednosti tehnologije PCR:

  1. Hitrost pridobivanja rezultatov. Približno 5 ur ima zdravnik natančne podatke. Ta hitrost vam omogoča, da pacientu pomagate v nujnih primerih. Pogosteje je predoperativno obdobje.
  2. Dovoljeno, če drugih metod ni mogoče uporabiti. Na primer, pogosto ponavljanje rentgenskih žarkov vodi do sevanja. PCR ni nevaren za bolnika.
  3. Raziščete lahko vsako biološko okolje. Ugotovljene so tudi kompleksne oblike tuberkuloze.
  4. Metoda je varna, zato primerna za otroke.
  5. Okužba se zazna v kateri koli fazi.
  6. PCR ne omogoča, da bi skrili celo majhno število bakterijskih mikroformacij.
  7. Primerna za preverjanje morebitne ponovitve tuberkuloze.

Koliko je sputum analiza za tuberkulozo

Vzorci se vzamejo več kot enkrat. Ponovitve izključujejo možnost napak ali pridobivanje slabe kakovosti materiala, ki ne odraža pravega položaja in stanja pacienta. Kolikokrat za zbiranje izpljunka, povejte zdravniku. Najboljša možnost je trikrat na dan. Včasih se lahko zahtevajo dodatni vzorci. V katerih obdobjih zbirajo:

  1. Pred jedjo zjutraj.
  2. 3-4 ure po prvem testu.
  3. Drugi dan, tudi pred obroki.

Tuberkuloza je nevarna bolezen, ki lahko prizadene telo vsake osebe. Obstaja veliko primerov okužbe. Ob vsakem sumu na možnost okužbe ne čakajte na svetle simptome. Testirati ga je treba, ga pregledati in pravočasno začeti z zdravljenjem.

PCR diagnoza tuberkuloze pri otrocih in odraslih: indikacije za

Svetovna zdravstvena organizacija je pred dvajsetimi leti priznala, da je stopnja širjenja tuberkuloze izven nadzora in dosegla obseg epidemije. Od takrat se stanje ni izboljšalo. Vsako leto se odkrije več kot milijon primerov bolezni, od katerih je skoraj četrtina smrtna. V zadnjem desetletju se je stopnja pojavnosti pri otrocih povečala, večina oblik bolezni ni primerna za standardno antibiotično zdravljenje.

Danes je ena od globalnih nalog za medicino razvoj takšnih diagnostičnih metod, ki bodo omogočile identifikacijo patologije pred nastopom izrazitih kliničnih simptomov. Ena izmed njih je verižna reakcija s polimerazo (PCR) za tuberkulozo, ki pomaga pri odkrivanju Kohovih bolezenskih palic v krvi, sputumu in drugih bioloških tekočinah.

Diagnoza tuberkuloze

Presejalni testi so namenjeni odkrivanju bolnikov, nosilcev tuberkuloze in preprečevanju širjenja okužbe v družbi. Za otroke, mlajše od 14 let, se Mantoux test uporablja množično. To je imunološki test, pri katerem se subkutano injicira odmerek tuberkulina - kompleksna mešanica genskega materiala več vrst mikobakterij. Pojav izrazite reakcije kaže na aktivno pojavljanje infekcijskega procesa.

Za preventivni pregled pri odraslih s fluorografijo ali rentgenskimi žarki. Te metode pomagajo vizualizirati patološke lezije v pljučnem tkivu. Vendar pa povzroča težave pri diferenciaciji tuberkuloze od druge organske patologije (maligne in benigne neoplazme, vnetni procesi, parazitske invazije, poklicno poškodbo pljuč).

Za pojasnitev strukture in velikosti patološkega žarka so potrebne dodatne instrumentalne študije:

  • ciljno radiografijo;
  • računalniška tomografija;
  • slikanje z magnetno resonanco.

Metode za diagnozo tuberkuloze

V primeru dvomljivih rezultatov in za imenovanje ustreznega zdravljenja je potrebno natančnejše diagnostične metode, ki omogočajo izolacijo patogena. Mikroskopsko in bakteriološko preiskavo sputuma uporabljamo za dolgotrajno potrditev pljučnih oblik tuberkuloze.

V zadnjih letih je pogostejša pojavnost mikobakterij različnih organov in sistemov - ledvic, kosti, črevesja, kože. Za identifikacijo teh oblik tuberkuloze, ultrazvočnih preiskav, kulture urina in blata se lahko uporabijo endoskopske preiskave.

PCR diagnostika za tuberkulozo bo pomagala potrditi prisotnost kohovih palic v krvi, pa tudi njeno občutljivost na določene droge. To je zelo učinkovita metoda, ki temelji na odkrivanju bakterijskega genskega materiala v različnih bioloških tekočinah.

Specifičnost in indikacije

Polimerazna verižna reakcija je zelo občutljiva mikrobiološka diagnostična metoda, ki temelji na načelih genskega inženiringa. Za potrditev prisotnosti patogena v biološkem materialu zadostuje, da se za to odkrije edinstveni fragment nukleinske kisline. PCR za tuberkulozo lahko zazna bakterije v krvi, izpljunku, urinu.

Trenutno je razvitih več analiznih metod. Najbolj priljubljeni med njimi so:

  • PCR v realnem času;
  • mikrofluidna tehnologija;
  • sekvenciranje in pirosekvenciranje.

PCR v realnem času

Laboratoriji najpogosteje uporabljajo verižno reakcijo s polimerazo v realnem času, saj zmanjšuje število lažno pozitivnih rezultatov, proces analize pa traja kratek čas.

Glede na veliko število skritih oblik bolezni in neučinkovitost standardnih diagnostičnih metod se PCR vedno bolj uporablja. Namen te analize je prikazan na:

  • prepoznavanje sumljivih območij na rentgenskih žarkih;
  • dvomljivi rezultati tuberkulinskega testa;
  • nezmožnost izvajanja mikroskopske in bakteriološke analize sputuma pri osebah v resnem stanju;
  • izvajanje kirurških posegov, kadar je potrebno hitro zagotoviti, da ni okužbe;
  • nedopustnost uporabe fluorografije, rentgenskih slik ali računalniške tomografije (na primer pri nosečnicah in dojenju, v primeru presežne izpostavljenosti sevanju);
  • sum na zunajplazemsko tuberkulozo (priporočljivo je, da se ne uporablja le kri, ampak tudi sluz).

PCR diagnostika tuberkuloze se je izkazala pri pregledu otrok zaradi pomanjkanja dodatne izpostavljenosti in hitrih rezultatov.

Postopek priprave in analize

Posebni pripravki za PCR krvi niso potrebni. Da bi se izognili zapletom vzorčenja krvi in ​​da bi dobili kakovosten material, je treba upoštevati naslednja splošna pravila: t

  • analizo je treba opraviti zjutraj ne prej kot 2 uri po prebujanju;
  • Omejiti je treba vnos maščob in ocvrte hrane dan pred odvzemom krvi;
  • prenehajte jesti, piti čaj in kavo 8-9 ur, dovoljeno je piti čisto vodo;
  • Ne kadite vsaj 3-4 ure.

V primeru trajnih zdravil (hormoni, antikoagulanti, protivnetna zdravila, antibiotiki, sredstva za redčenje krvi) morate o tem obvestiti laboratorijskega asistenta.

Po sputumu morate dobro umiti zobe in večkrat sperite usta. Zberite material v sterilni posodi. Za boljše rezultate lahko v večernih urah vzamete ekspektorans ali mukolitik.

Diagnoza je sestavljena iz več faz.

    Material ograje. Izvaja se lahko v laboratoriju in na daljavo. Nekatere vrste materialov, ki jih bolnik zbira neodvisno (urin, sluz).

Uničenje strukture nukleinskih kislin (denaturacija molekul DNA in RNA). V ta namen se testni material segreje na temperaturo 98 stopinj in se zadrži nekaj minut. Posledično se dvojna vijačnica odvija, nastanejo enoverižne molekule.

  • Žarjenje Po dodajanju premaza (kratkega dela nukleinske kisline) se temperatura zniža za nekaj stopinj, aktivira se polimeraza.
  • Elognation. Temperatura se dvigne na optimalno raven, encimska aktivnost doseže maksimum in druga veriga se zaključi v skladu s Chargaffovim pravilom komplementarnosti.

    • Za dokončanje študije je potrebno sintetizirati potrebno število molekul DNA - približno 50 ciklov zgornje reakcije. Traja približno 2-3 ure. Pozitiven rezultat reakcije ne kaže vedno na aktivno stopnjo bolezni, temveč je pokazatelj prisotnosti mikroorganizma v telesu.

    Prednosti in slabosti metode

    V primerjavi z drugimi mikrobiološkimi metodami PCR ne zahteva dolgotrajnega odkrivanja Mycobacterium tuberculosis z uporabo PCR, rezultat lahko dobimo na dan testiranja.

    Druga prednost je visoka specifičnost analize, ki omogoča odkrivanje prisotnosti patogena z natančnostjo 90-95% v skoraj vseh biomaterialih (kri, urin, blato, cerebrospinalna tekočina, izpljunost, zardevanje bronha).

    Vendar pa obstaja več pomanjkljivosti metode:

    • precej visok odstotek lažno pozitivnih rezultatov (do 15%), kar je povezano z odkrivanjem neživih mikroorganizmov;
    • v nekaterih primerih lahko opustimo dejstvo bolezni, ker je Mycobacterium tuberculosis pogosto izpostavljen mutacijam in spremembam genskega materiala;
    • nizka učinkovitost pri pregledu ljudi z imunsko pomanjkljivostjo;
    • visoki stroški raziskav, potreba po dragi opremi in reagentih.

    Kaj je mogoče zamenjati?

    Zaradi raznolikosti oblik tuberkulozne okužbe je za natančnejšo diagnozo in izbiro zdravljenja potrebno združiti več diagnostičnih študij:

      Obvezna analiza za otroke je Mantoux test. Če se vnos tuberkulina (genetskega materiala mikobakterij) pojavi izrazito, se lahko domneva okužba s tuberkuloznim bacilom.

    Za vizualizacijo patološkega ostrenja lahko uporabimo rentgenske metode. Pri diagnozi zunaj pljučne tuberkuloze se z istočasno biopsijo uporabljajo endoskopske metode:

    • bronhoskopija pomaga identificirati poškodbe grla, sapnika, bronhijev;
    • kolonoskopija - črevesje;
    • cistouretroskopija - organi urinarnega sistema;
    • histeroskopija - ženske genitalije. Te metode niso specifične, zato je treba za natančno diagnozo določiti patogen.

    Splošni klinični testi bodo pomagali natančneje določiti stanje telesa. Potrebna je popolna krvna slika z levkocitno formulo.

    Povečanje števila nevtrofilcev z zmanjšano stopnjo limfocitov in povečanje hitrosti sedimentacije eritrocitov (ESR) kaže na aktivni vnetni proces bakterijske etiologije. Izključiti poškodbe organov urinarnega sistema z uporabo splošne analize urina in kulture za sterilnost.

    PCR je trenutno na voljo v večini zasebnih laboratorijev. To zahteva ne le visoko usposobljene strokovnjake, ampak tudi drago opremo, veliko število reagentov. Zato je uporaba te metode omejena kljub svoji visoki natančnosti in specifičnosti.

    Prednosti in slabosti PCR (a) za diagnozo tuberkuloze

    Specifična tuberkulozna okužba je v človeških tkivih in strukturah prisotna že vrsto let in v določenih okoliščinah se hitro širi po vsem telesu v 2-3 mesecih. Včasih je najboljši način zdravljenja zelo težko izbrati zaradi pozne diagnoze in prilagoditve patogena številnim zdravilom.

    Najnovejša PCR diagnoza tuberkuloze pomaga pri odkrivanju ne le razvite bolezni, temveč tudi samega patogena, ko se prvi znaki bolezni še niso pojavili.

    Kaj je PCR?

    Nedavno se je pojavila diagnoza tuberkuloze s PCR. Leta 1983 je mikrobiolog iz Amerike Cary Mullis izumil postopek, s katerim bi se mikroorganizmi lahko rekonstruirali iz biološkega materiala v kratkem segmentu. To delo je prejelo Nobelovo nagrado.

    PCR za tuberkulozo je proces polimerne verige, pri katerem diagnosticiranje in odkrivanje virusnih patogenov z genskim inženiringom. Tehnika se uporablja v imunoloških, mikrobioloških, viroloških in biokemijskih laboratorijih.

    Univerzalna metoda pomaga zdravnikom pri diagnosticiranju in identifikaciji infekcijskega procesa tudi po prvih urah okužbe, veliko pred nastopom simptomov. Raziskave so možne tudi z majhno količino biomateriala.

    Kaj je potrebno za analizo?

    • Več segmentov DNA (primeri), s katerimi se začne biološka sinteza;
    • Nukleotidne spojine, osnova molekule DNA ali RNA;
    • Encim polimeraze, ki pospešuje analizo PCR.

    Kaj je osnova metode?

    Najprej se iz biomateriala okužene osebe ekstrahira segment DNA, pri čemer se z metodami genske molekularne biosinteze določijo vrste mikroorganizmov, katerim pripada biofragment.

    Ta kompleksna reakcija traja manj časa kot nekateri biometodi. PCR določa patogen v nekaj urah, medtem ko ga ni treba izolirati od biološke tekočine (izpljunek, cerebrospinalni ali krvni medij), zato ga ni potrebno dolgo časa gojiti na hranilnem mediju. Dovolj je, da proučevani material vsebuje DNA verigo infekcijskega patogena.

    Pri opravljanju PCR krvnega testa za tuberkulozo in vitro se sintetizira ribonukleinska kislina mikobakterije tuberkuloze.

    Faze diagnoze

    Molekularna reakcija s PCR je preprost postopek, ki traja malo časa. Potreben je potreben biomaterial: za določanje stopnje tajnosti se uporabi kri, izpljunka, bronhialna tekočina za pranje.

    1. Najprej uničimo primarno obliko DNA, ločimo dve verigi pri visoki temperaturi (največ 98 ° C za največ 2 minuti);
    2. Nato se izvede žarjenje, primarna temperatura se zmanjša za več delitev, DNA veriga je povezana s primerjem;
    3. Naslednja faza se imenuje raztezek z biosintezo potrebnih molekularnih struktur.

    Za pridobitev potrebnega števila kopij DNK mora preteči od 25 do 30 takih ciklov in tako dobljeno število mikobakterij je enostavno prepoznati.

    Ali je treba opraviti PCR za tuberkulozo?

    Neposredno za vse bolnike, pri katerih obstaja sum TVC, diagnostika verige ni izvedena, saj postopek zahteva uporabo drage opreme. Vse medicinske ustanove ne dovoljujejo, da bi jih kupili, še posebej zato, ker so običajne metode diagnosticiranja mikobakterije tuberkuloze tudi informativne.

    • Skrbno anamnezo, zaslišanje bolnika;
    • Zunanji pregled;
    • Mantoux tuberkulinski test;
    • Radiografski ali fluorografski pregled;
    • Po potrebi računalniška diagnostika;
    • Mikroskopsko ali bakteriološko preiskavo maske z izpljunkom.

    PCR za tuberkulozo se izvaja samo, če ni mogoče izvesti druge instrumentalne analize ali v okoliščinah, ki jih je težko diagnosticirati.

    Kljub temu, da je izumljeno veliko število diagnostičnih metod, se število bolnikov s tuberkulozo še naprej povečuje. Poleg tega je pojavnost pridobila nekatere značilnosti: huda oblika bolezni je pogosto opažena, število smrtnih primerov se povečuje, patogen postane odporen na obstoječe kemoterapijske droge.

    Mnogi ljudje ne želijo vsako leto opraviti rutinskega pregleda, zavračajo cepljenje, kar vodi do povečanja pojavnosti. Takšne okoliščine zahtevajo učinkovite in informativne raziskovalne metode, ki so na voljo odraslim in otrokom z diagnozo Tbc. PCR ima prednosti pred drugimi diagnostičnimi metodami.

    Kakšna je vrednost metode?

    Ta zadnja raziskava se je dobro izkazala. Če je iz več razlogov težko postaviti diagnozo ali, v nekaterih spornih primerih, PCR lažje zazna tuberkulozni bacil v biološkem materialu kot druge metode.

    • Ta hitra študija, majhen segment molekule, omogoča natančno diagnozo v kratkem času v približno 5 urah, kar se uporablja v nujnih primerih, na primer pred nujnim kirurškim posegom;
    • Preiskava krvi na tuberkulozo je mogoča, če druge metode niso na voljo ali so kontraindicirane - včasih za odkrivanje patogena tbc, je treba vzeti veliko Rg-strelov, pri čemer je doza sevanja prevelika;
    • Z uporabo polimerazne reakcije lahko pregledamo vse biološke tekočine za prisotnost mikobakterij. Na primer, lahko opravite študijo cerebrospinalne tekočine s tuberkuloznim meningitisom ali urinom z urogenitalno tuberkulozo;
    • Metoda je varna, diagnoza tuberkuloze pri otrocih s PCR ne povzroča težav;
    • Metoda reakcije polimera razkriva tuberkulozni bacil v vseh oblikah in fazah bolezni;
    • Prisotnost le nekaj bakterij v biomaterialu vam omogoča, da vidite prisotnost mikroorganizmov, saj je to občutljiva reakcija;
    • PCR zlahka diagnosticira ponovitev bolezni.

    Kljub velikemu številu prednosti, vsi bolniki s sumom na študijo tbc niso opravljeni, saj obstajajo tudi slabosti, ki jih upoštevamo tudi.

    Video

    Video - zgodnja diagnoza

    Katere so slabosti?

    Ta metoda diagnoze je precej izjemna kot naravna, za to obstajajo razlogi. Prvič, upoštevajo se visoki stroški metode. Oprema je draga, javne klinike nimajo možnosti, da bi jo kupile zaradi visoke cene, vendar ima večina plačanih laboratorijev opremo, jih analizirajo.

    • Metoda zazna mrtve bakterije, ki so umrle po zdravljenju, medtem ko PCR kaže pozitiven rezultat. Takoj po kemoterapiji ni smiselno izvajati študije, saj bo rezultat nezanesljiv;
    • Mutacije bakterije Mycobacterium tuberculosis so dovzetne, kar vodi do neučinkovitosti metode, in verige DNA ni mogoče sintetizirati dosledno.

    Okolje za študijo je treba skrbno izbrati, kri ali urin se lahko zbira le, če obstaja sum okužbe. Sputuma ne smete jemati za pregled, če sumite na tuberkulozo kosti. V tem primeru bo diagnoza napačna.

    Krv in urin bolnika s tuberkulozo, ki ju je treba preučiti ob PCR, se redko jemlje, tako da je identifikacija bolezni vprašljiva. V teh bioloških medijih je patogen določen le v sepsi ali v primeru razširjene tuberkuloze. Lokalne oblike so najpogostejše, njihova krv in urin lahko ostanejo nespremenjene. Najpogosteje se sluz vzame za pregled.

    Kdo prikazuje analizo?

    Večina bolnikov je poslana na diagnozo PCR v spornih in težkih primerih tuberkuloze. Kdaj zdravniki izdajajo napotnice za raziskave?

    1. Če obstaja stik z osebo, ki je bila zanesljivo diagnosticirana s tuberkulozo, vendar jo je težko diagnosticirati z uporabo običajnih metod;
    2. V teh okoliščinah, če je bolnik zagotoviti kliniki je nemogoče za radiografijo ali druge raziskave. V takem primeru je lažje pregledati z uporabo polimerne metode. Analiza sputuma se preprosto dostavi v laboratorij v posebni posodi, rezultat pa postane znan po nekaj urah;
    3. Pred operacijo je nujno treba ugotoviti, ali je bolnik bolan s tuberkulozo, v tem primeru je indicirana PCR;
    4. Zaradi varnosti metode je možno opraviti pregled nosečnice ali otroka brez ustvarjanja dodatne rentgenske obremenitve;
    5. Dvomljivi rezultati Mantoux testov.

    Vsakdo, ki želi, lahko opravi pregled za plačilo, če tuberkuloza ni potrjena s pomočjo bakteriologije in fluoroskopije. To se zgodi, če je lezija v pljučnem tkivu v Rg-sliki nevidna v neposredni projekciji, bolnik pa ne more pravilno zbrati izpljunka, vendar so znaki humane tuberkuloze moteni.

    Sodobna reakcija PCR za diagnozo je ključna za uspešno zdravljenje, zaradi česar se prevalenca bolezni zmanjša. Tradicionalne metode prepoznavanja bolezni ne dajejo vedno želenega učinka.

    PCR analiza je postala ena od zanesljivih in varnih diagnostičnih metod v zgodnjih fazah bolezni.

    Dodatne Člankov O Laringitis