Polimerna verižna reakcija (PCR) za tuberkulozo

Tuberkuloza je ena najnevarnejših bolezni, iz katere človeštvo trpi več sto let. Čeprav so znanstveniki znali identificirati povzročitelja in izumiti antibiotike, da bi ga odpravili, zdravljenje ni vedno uspešno. Glavni razlog je dolgo obdobje latentne ali latentne oblike bolezni, ki lahko traja več let. Pozna diagnoza pomembno zmanjša pacientove možnosti za okrevanje in polno življenje.

Kaj je PCR?

Za odkrivanje tuberkuloze mikobakterije v telesu že več kot sto let je bil uspešno uporabljen Mantoux test. Druge metode so se dobro izkazale: bakteriološka kultura v umetnem gojišču, mikroskopija po razmazu, ELISA. Vendar pa je veliko število zapletov in lažno pozitivnih rezultatov ter trajanje nekaterih metod zahtevalo uvedbo novih tehnologij v diagnostično metodologijo. Velik preboj na področju mikrobiologije je bil pojav PCR analize za tuberkulozo. Že več desetletij kaže svojo učinkovitost in se pogosto uporablja za diferencialno diagnozo različnih oblik tuberkuloze.

PCR analiza za tuberkulozo ali polimerazno verižno reakcijo je metoda za odkrivanje DNA bakterij ali njihovih fragmentov, ki temelji na povečanju molekul nukleinskih kislin pod vplivom encimske DNA polimeraze. Za pozitiven rezultat zadostuje le ena molekula patogene DNA, zato je ta metoda zelo občutljiva. Diagnoza OCP pri tuberkulozi je učinkovitejša kot sejanje mikobakterij v umetnem okolju, saj v nasprotju s kulturo omogoča razlikovanje med divjimi in cepivnimi sevi, ki so bili cepljeni z BCG. S tem se izognemo napačnim pozitivnim rezultatom in postavimo diagnozo bolj natančno.

Koristi PCR

PCR diagnostika za tuberkulozo omogoča odkrivanje Kochovega bacila v vsakem biološkem okolju organizma z določitvijo njihove kvantitativne sestave tudi v začetni fazi bolezni, ko so mikobakterije v mirovanju. Diagnoza bolezni v latentni fazi omogoča pravočasno začetek profilaktičnega zdravljenja, da se prepreči razvoj žarišč vnetja v pljučih in pojav komplikacij v drugih organih in sistemih. Poleg tega ima PCR test za tuberkulozo številne prednosti: t

• visoka specifičnost - 90-100%;
• visoka hitrost - od 4 ure do 2 dni;
• visoka občutljivost, zlasti pri imunski pomanjkljivosti;
• diferencialna diagnoza.

Glavna prednost metode je v tem, da diagnoza CRC tuberkuloze pri otrocih omogoča razlikovanje med razširjeno obliko bolezni in omejenim žariščem, tudi z negativnimi rezultati drugih testov. Diferencialno testiranje vam omogoča, da izberete pravi režim zdravljenja in povečate učinkovitost zdravljenja.

Visoka specifičnost analize je dosežena z odpravo navzkrižnih reakcij z drugimi molekulami nukleinskih kislin, visoka občutljivost pa omogoča odkrivanje mikobakterij tudi v majhni količini zbranega materiala. PCR metoda sputuma za tuberkulozo ima največjo zanesljivost, njegova specifičnost doseže 100% v primerjavi s študijo drugih bioloških materialov.

Poseben mehanizem PCR zagotavlja številne možnosti za odkrivanje kohovih palic pri bolnikih z oslabljenim imunskim sistemom. Glede na analizno metodo reakcija zazna antigene, zato ni pomembno, ali telo proizvaja protitelesa proti patogenu ali ne. Tako je možno diagnozo zunaj pljučnih oblik bolezni in napredovalnih primerov pri bolnikih z nepravilnostmi v imunskem sistemu, ki ni mogoče z drugimi metodami, diagnosticirati.

Slabosti metode

Kljub številnim prednostim in visoki občutljivosti testa lahko PCR za tuberkulozo daje lažno negativen rezultat. Ker se za diagnozo vzame zelo majhna količina biomateriala, dejstvo, da se patogen »skriva« v celični ali vnetni fokus, ni izključeno in se ne sprosti zunaj.

Občutljivost te metode pri otrocih je 25–80%. Na primer, v randomizirani študiji v skupini bolnikov s klinično dokazano diagnozo je PCR krvni test za tuberkulozo dala pozitiven rezultat le pri 50% bolnikov. V zvezi s tem pri testiranju otroka na patogene mikobakterije ni mogoče nadomestiti ene diagnostične metode z drugo. Da bi v celoti preverili odsotnost okužbe, je treba izvesti obsežno študijo na več načinov hkrati.

Postopek zbiranja

Glavni pogoj za zanesljivost PCR diagnostike je skladnost s pravili za zbiranje bioloških tekočin za analizo. Onesnažen ali nepravilno zbran material lahko povzroči nepravilne rezultate. Najpogostejši so analiza izpljunka, krvi in ​​urina, vendar za globljo diferencialno diagnozo lahko vzamete vzorce iz vsebine želodca, sinovialne tekočine, cerebrospinalne tekočine, bronhialne tekočine, sperme, izločanja prostate.

PCR za tuberkulozo v urinu jemljemo zjutraj po zunanji spolni higieni z uriniranjem v sterilno posodo. Med postopkom je pomembno, da se ne dotaknete notranjih sten vsebnika, da preprečite vdor mikroorganizmov tretjih oseb. Ženske, ki živijo redno spolno življenje, bi morale v vagino zagotovo postaviti tampon, da se izognejo tretjim osebam.

Krvni test se izvaja zjutraj na prazen želodec, PCR sputuma za tuberkulozo pa se lahko opravi ob katerem koli času dneva z obvezno predhodno ustno higieno. To je potrebno za odstranitev ostankov hrane, ki lahko vstopijo v posodo. Pri izkašljevanju izpljunka je pomembno preprečiti vdor sline in sluzi iz nazofarinksa v posodo, kar lahko izkrivlja podatke analize.

Študija vsebine želodca poteka v bolnišnici zgodaj zjutraj, medtem ko je sputum čez noč pogoltnil v želodcu. Da bi odkrili mikobakterijo tuberkulozo, ta metoda omogoča trikratno sejanje, kar najverjetneje omogoča izolacijo kohovega bacila.

Rezultati dekodiranja

Kvalitativna analiza PCR daje 2 vrsti "zaznanih" ali "nezaznanih" rezultatov. Označujejo pozitivno in negativno razsodbo. Odgovor "zaznano" pomeni, da je DNK infekcijskega povzročitelja prisotna v testnem vzorcu in da je telo z 97% verjetnostjo okuženo s tuberkulozo. Negativen rezultat kaže na odsotnost Kochove palice v vzorcu biološkega materiala in 97% možnost, da telo nima velikega števila mikobakterij, in 60%, da oseba ni okužena.

Največja specifičnost za diagnozo tuberkuloze je krvni test in sputum. S pozitivnim rezultatom kažejo na okužbo telesa, kar zahteva nujne terapevtske ukrepe. Študije drugih biomaterialov ne kažejo na potek bolezni, ampak samo na prisotnost tujih bakterij. To se zgodi, ko je oseba nosilec bolezni, ne pa širjenja okužbe v okolje in ne okuži zdravih ljudi.

Kvantitativna PCR analiza se izvaja redkeje, zdravnik pa se ukvarja z dekodiranjem njegovih rezultatov. Raziskovalni kazalniki se uporabljajo za določanje aktivnosti bolezni in stopnje poškodbe telesa. Na podlagi pridobljenih podatkov lahko specialist določi učinkovitost zdravljenja in, če je potrebno, prilagodi terapevtsko shemo.

Tuberkuloza je bila in ostaja ena najresnejših težav za zdravje vsega človeštva. Sodobne diagnostične metode lahko odkrijejo bolezen v zgodnji fazi, da se lahko začne zdravljenje pravočasno. Tuberkulinski test, mikroskopija brisa, kultura bakterij na umetnih hranilnih medijih so se dokazali na področju laboratorijske diagnostike tuberkuloze. Toda dolgotrajno čakanje na rezultate in večja pogostost lažno pozitivnih odčitkov so postali zastareli in v ospredje postavili naprednejše tehnologije. PCR analiza je zelo specifična in zelo učinkovita metoda za diagnosticiranje tuberkuloze. Njegovi rezultati so najbolj zanesljivi med vsemi predlaganimi laboratorijskimi metodami za odkrivanje kohovih palic. Omogoča ne le dokončno razsodbo, temveč tudi izvedbo potrebne diferencialne diagnoze.

PCR diagnoza tuberkuloze pri otrocih in odraslih: indikacije za

Svetovna zdravstvena organizacija je pred dvajsetimi leti priznala, da je stopnja širjenja tuberkuloze izven nadzora in dosegla obseg epidemije. Od takrat se stanje ni izboljšalo. Vsako leto se odkrije več kot milijon primerov bolezni, od katerih je skoraj četrtina smrtna. V zadnjem desetletju se je stopnja pojavnosti pri otrocih povečala, večina oblik bolezni ni primerna za standardno antibiotično zdravljenje.

Danes je ena od globalnih nalog za medicino razvoj takšnih diagnostičnih metod, ki bodo omogočile identifikacijo patologije pred nastopom izrazitih kliničnih simptomov. Ena izmed njih je verižna reakcija s polimerazo (PCR) za tuberkulozo, ki pomaga pri odkrivanju Kohovih bolezenskih palic v krvi, sputumu in drugih bioloških tekočinah.

Diagnoza tuberkuloze

Presejalni testi so namenjeni odkrivanju bolnikov, nosilcev tuberkuloze in preprečevanju širjenja okužbe v družbi. Za otroke, mlajše od 14 let, se Mantoux test uporablja množično. To je imunološki test, pri katerem se subkutano injicira odmerek tuberkulina - kompleksna mešanica genskega materiala več vrst mikobakterij. Pojav izrazite reakcije kaže na aktivno pojavljanje infekcijskega procesa.

Za preventivni pregled pri odraslih s fluorografijo ali rentgenskimi žarki. Te metode pomagajo vizualizirati patološke lezije v pljučnem tkivu. Vendar pa povzroča težave pri diferenciaciji tuberkuloze od druge organske patologije (maligne in benigne neoplazme, vnetni procesi, parazitske invazije, poklicno poškodbo pljuč).

Za pojasnitev strukture in velikosti patološkega žarka so potrebne dodatne instrumentalne študije:

• ciljno radiografijo;
• računalniška tomografija;
• slikanje z magnetno resonanco.

Metode za diagnozo tuberkuloze

V primeru dvomljivih rezultatov in za imenovanje ustreznega zdravljenja je potrebno natančnejše diagnostične metode, ki omogočajo izolacijo patogena. Mikroskopsko in bakteriološko preiskavo sputuma uporabljamo za dolgotrajno potrditev pljučnih oblik tuberkuloze.

V zadnjih letih je pogostejša pojavnost mikobakterij različnih organov in sistemov - ledvic, kosti, črevesja, kože. Za identifikacijo teh oblik tuberkuloze, ultrazvočnih preiskav, kulture urina in blata se lahko uporabijo endoskopske preiskave.

PCR diagnostika za tuberkulozo bo pomagala potrditi prisotnost kohovih palic v krvi, pa tudi njeno občutljivost na določene droge. To je zelo učinkovita metoda, ki temelji na odkrivanju bakterijskega genskega materiala v različnih bioloških tekočinah.

Specifičnost in indikacije

Polimerazna verižna reakcija je zelo občutljiva mikrobiološka diagnostična metoda, ki temelji na načelih genskega inženiringa. Za potrditev prisotnosti patogena v biološkem materialu zadostuje, da se za to odkrije edinstveni fragment nukleinske kisline. PCR za tuberkulozo lahko zazna bakterije v krvi, izpljunku, urinu.

Trenutno je razvitih več analiznih metod. Najbolj priljubljeni med njimi so:

• PCR v realnem času;
• mikrofluidna tehnologija;
• sekvenciranje in pirosekvenciranje.

PCR v realnem času

Laboratoriji najpogosteje uporabljajo verižno reakcijo s polimerazo v realnem času, saj zmanjšuje število lažno pozitivnih rezultatov, proces analize pa traja kratek čas.

Glede na veliko število skritih oblik bolezni in neučinkovitost standardnih diagnostičnih metod se PCR vedno bolj uporablja. Namen te analize je prikazan na:

• prepoznavanje sumljivih območij na rentgenskih žarkih;
• dvomljivi rezultati tuberkulinskega testa;
• nezmožnost izvajanja mikroskopske in bakteriološke analize sputuma pri osebah v resnem stanju;
• izvajanje kirurških posegov, kadar je potrebno hitro zagotoviti, da ni okužbe;
• nedopustnost uporabe fluorografije, rentgenskih slik ali računalniške tomografije (na primer pri nosečnicah in dojenju, v primeru presežne izpostavljenosti sevanju);
• sum na zunajplazemsko tuberkulozo (priporočljivo je, da se ne uporablja le kri, ampak tudi sluz).

PCR diagnostika tuberkuloze se je izkazala pri pregledu otrok zaradi pomanjkanja dodatne izpostavljenosti in hitrih rezultatov.

Postopek priprave in analize

Posebni pripravki za PCR krvi niso potrebni. Da bi se izognili zapletom vzorčenja krvi in ​​da bi dobili kakovosten material, je treba upoštevati naslednja splošna pravila: t

• analizo je treba opraviti zjutraj ne prej kot 2 uri po prebujanju;
• Omejiti je treba vnos maščob in ocvrte hrane dan pred odvzemom krvi;
• prenehajte jesti, piti čaj in kavo 8-9 ur, dovoljeno je piti čisto vodo;
• Ne kadite vsaj 3-4 ure.

V primeru trajnih zdravil (hormoni, antikoagulanti, protivnetna zdravila, antibiotiki, sredstva za redčenje krvi) morate o tem obvestiti laboratorijskega asistenta.

Po sputumu morate dobro umiti zobe in večkrat sperite usta. Zberite material v sterilni posodi. Za boljše rezultate lahko v večernih urah vzamete ekspektorans ali mukolitik.

Diagnoza je sestavljena iz več faz.

Material ograje. Izvaja se lahko v laboratoriju in na daljavo. Nekatere vrste materialov, ki jih bolnik zbira neodvisno (urin, sluz).

Uničenje strukture nukleinskih kislin (denaturacija molekul DNA in RNA). V ta namen se testni material segreje na temperaturo 98 stopinj in se zadrži nekaj minut. Posledično se dvojna vijačnica odvija, nastanejo enoverižne molekule.

Žarjenje Po dodajanju premaza (kratkega dela nukleinske kisline) se temperatura zniža za nekaj stopinj, aktivira se polimeraza.

Elognation. Temperatura se dvigne na optimalno raven, encimska aktivnost doseže maksimum in druga veriga se zaključi v skladu s Chargaffovim pravilom komplementarnosti.

Za dokončanje študije je potrebno sintetizirati potrebno število molekul DNA - približno 50 ciklov zgornje reakcije. Traja približno 2-3 ure. Pozitiven rezultat reakcije ne kaže vedno na aktivno stopnjo bolezni, temveč je pokazatelj prisotnosti mikroorganizma v telesu.

Prednosti in slabosti metode

V primerjavi z drugimi mikrobiološkimi metodami PCR ne zahteva dolgotrajnega odkrivanja Mycobacterium tuberculosis z uporabo PCR, rezultat lahko dobimo na dan testiranja.

Druga prednost je visoka specifičnost analize, ki omogoča odkrivanje prisotnosti patogena z natančnostjo 90-95% v skoraj vseh biomaterialih (kri, urin, blato, cerebrospinalna tekočina, izpljunost, zardevanje bronha).

Vendar pa obstaja več pomanjkljivosti metode:

• precej visok odstotek lažno pozitivnih rezultatov (do 15%), kar je povezano z odkrivanjem neživih mikroorganizmov;
• v nekaterih primerih lahko opustimo dejstvo bolezni, ker je Mycobacterium tuberculosis pogosto izpostavljen mutacijam in spremembam genskega materiala;
• nizka učinkovitost pri pregledu ljudi z imunsko pomanjkljivostjo;
• visoki stroški raziskav, potreba po dragi opremi in reagentih.

Kaj je mogoče zamenjati?

Zaradi raznolikosti oblik tuberkulozne okužbe je za natančnejšo diagnozo in izbiro zdravljenja potrebno združiti več diagnostičnih študij:

Obvezna analiza za otroke je Mantoux test. Če se vnos tuberkulina (genetskega materiala mikobakterij) pojavi izrazito, se lahko domneva okužba s tuberkuloznim bacilom.

Za vizualizacijo patološkega ostrenja lahko uporabimo rentgenske metode. Pri diagnozi zunaj pljučne tuberkuloze se z istočasno biopsijo uporabljajo endoskopske metode:

• bronhoskopija pomaga identificirati poškodbe grla, sapnika, bronhijev;
• kolonoskopija - črevesje;
• cistouretroskopija - organi urinarnega sistema;
• histeroskopija - ženske genitalije. Te metode niso specifične, zato je treba za natančno diagnozo določiti patogen.

Splošni klinični testi bodo pomagali natančneje določiti stanje telesa. Potrebna je popolna krvna slika z levkocitno formulo.

Povečanje števila nevtrofilcev z zmanjšano stopnjo limfocitov in povečanje hitrosti sedimentacije eritrocitov (ESR) kaže na aktivni vnetni proces bakterijske etiologije. Izključiti poškodbe organov urinarnega sistema z uporabo splošne analize urina in kulture za sterilnost.

PCR je trenutno na voljo v večini zasebnih laboratorijev. To zahteva ne le visoko usposobljene strokovnjake, ampak tudi drago opremo, veliko število reagentov. Zato je uporaba te metode omejena kljub svoji visoki natančnosti in specifičnosti.

PCR analiza za diagnozo tuberkuloze

Medicina nikoli ne miruje in doslej napredek v zdravstvenem sektorju omogoča diagnosticiranje in zdravljenje številnih predhodno nespremenjenih bolezni. Obstajajo tudi bolezni, ki jih ni mogoče odkriti z vizualnim pregledom. Tuberkuloza je bila vedno med njimi. To je nevarna nalezljiva bolezen, ki prizadene pljuča, sklepe in kosti, in pogosto tudi v naših dneh vodi v smrt. Izboljšane so bile diagnostične metode za to bolezen, ki omogočajo zaznavanje bolezni v zgodnejših fazah, ko se zdravi. Med njimi niso le testi z rentgenskimi žarki in Mantoux, ampak tudi PCR za tuberkulozo.

Tuberkuloza - kaj je to

Prej se je tuberkuloza imenovala suha bolezen ali ptiza. To je bakterijska okužba, ki najpogosteje prizadene pljuča. Njene ekstrapulmonalne oblike - tuberkuloza kosti in sklepov, tuberkulozni meningitis - so manj pogoste in naprednejše faze. Povzročitelj te nalezljive bolezni so mikobakterije. Tuberkulozni bacil se imenuje tudi Kohova palica.

Okužba s tuberkulozo je zelo nalezljiva, prenaša se s kapljicami v zraku pri kašljanju in kihanju bolnika. Edina zaščita pred to boleznijo je pravočasno dostavljeno cepivo. Ne ščiti pred okužbami, vendar pa ne dovoljuje, da bakterije vstopijo v telo in povzročijo tuberkulozo.

Oblike tuberkuloze

Bolezen se lahko pojavi v odprti in zaprti obliki. Razlike so naslednje:

• zaprta tuberkuloza je asimptomatska. V takih okoliščinah je nemogoče odkriti kohov palico v izpljunku, zato okuženo ni nevarno za okolje. Takšen potek bolezni ponavadi ne ogroža najbolj okuženih, vendar obstajajo izjeme - v desetih primerih zaprta tuberkuloza lahko pride v odprto obliko;
• z odprto obliko, mikobakterije, ki povzročajo tuberkulozo, najdemo v bolnikovi slini in izpljunku. Okužen organizem predstavlja veliko nevarnost za družbo, tudi v izolaciji. Praviloma bolezen prvi prizadene pljuča. Če ga ne diagnosticirajo zgodaj, se lahko pojavijo tudi druge oblike, kot je tuberkuloza kosti ali sklepov.

Odprto obliko tuberkuloze diagnosticiramo na različne načine. Bolnik se pregleda z rentgenskim posnetkom prsnega koša ali rentgenskim slikanjem prsnega koša, analizira njegov biološki material ali Mantoux kožni test. Nedavno se je pojavila še ena metoda, ki velja za enako učinkovito - analizo polimerazne verižne reakcije (PCR).

Kaj pomeni PCR?

V medicinski praksi se že dolgo uporabljajo metode diagnosticiranja te ali tiste bolezni z odkrivanjem njene DNA ali RNA v človeškem telesu. To je prav PCR za tuberkulozo. To je zelo natančna analiza krvi ali druge biološke tekočine, ki omogoča identifikacijo bakterij z minimalno koncentracijo v izbranem materialu, dovolj je samo ena celica. Študijo izvajamo s posebnim polimeraznim encimom.

Prednosti metode

PCR je diagnostična metoda, ki se je izkazala z najboljše strani, zato se uporablja pogosto, v kombinaciji z drugimi metodami in neodvisno. Njegove prednosti:

• najkrajših proizvodnih pogojih. Študija se izvede hitro, v približno 5 urah z uporabo PCR lahko zazna prisotnost tuberkuloznega bacila v biološki tekočini bolnika. To še posebej velja, če morate takoj izvesti kirurški poseg in pred tem dobite natančno diagnozo;
• Zgodi se, da so druge diagnostične metode za bolnika kontraindicirane. Na primer, rentgenske žarke ni mogoče storiti vsem. Poleg tega slike ni vedno mogoče postaviti diagnoze, še posebej, če je bolezen v zgodnji fazi. S pomočjo metode PCR se patogen takoj odkrije;
• Biološka tekočina vsakega bolnika je primerna za analizo. PCR urina in sline za tuberkulozo se izvaja za identifikacijo pljučnih in zunajpljučnih oblik. Študija se izvaja tudi z bolniško tekočino za odkrivanje tuberkuloznega meningitisa.
• Metoda je popolnoma varna. Da bi ga izvedli, je dovolj, da od bolnika pridobimo biološko tekočino. PCR diagnostika tuberkuloze pri otrocih je primerna in neškodljiva, saj je rentgenski pregled dovoljen šele od 18. leta starosti, Mantoux test pa včasih povzroči neželene učinke;
• PCR je zelo občutljiva analiza. Omogoča identifikacijo kohovih palic z minimalno koncentracijo mikobakterij;
• S pomočjo posebnega encima polimeraze diagnosticiramo bolezen v kateri koli fazi, od zgodnjega do naprednega;
• ta metoda je učinkovita pri diagnosticiranju ponovitve bolezni;
• Ta metoda je preboj pri natančni diagnozi v zgodnjih fazah bolezni. To vam omogoča, da začnete zdravljenje v najkrajšem možnem času in uničite patogene, ko še niso imeli nepopravljivega negativnega vpliva na organe in sisteme človeškega telesa.

Kje opraviti analizo PCR za tuberkulozo

Čeprav je analiza PCR za tuberkulozo zelo učinkovita metoda za diagnosticiranje te bolezni, se le redko uporablja sama. To je praviloma dodatna metoda odkrivanja tuberkuloze in se redko uporablja. Dejstvo je, da je ta metoda precej draga.

Javne klinike nimajo možnosti za nakup posebne opreme za izvajanje analize PCR, vlada pa ne vidi smisla pri financiranju tega članka, saj se tuberkulozo lahko diagnosticira na druge načine. Takšna študija se najpogosteje izvaja v zasebnih klinikah, ki si lahko privoščijo nakup potrebne opreme.

Slabosti metode

Visoka cena ni edina pomanjkljivost PCR. Poleg visokih stroškov ima metoda še druge pomanjkljivosti in pomanjkljivosti, na primer:

• PCR za tuberkulozo daje pozitiven rezultat tudi po zdravljenju, ker mrtve celice kot žive bakterije jemljejo, zato ta metoda ni primerna kot kontrolni pregled bolnika za potrditev njegovega okrevanja;
• tuberkulozni bacili mutirajo in njihova DNA se spremeni, kar lahko vpliva na zanesljivost rezultata;
• Krvni test PCR za tuberkulozo se redko izvaja, ker je prisotnost kohovih palic v teh bioloških tekočinah zelo težko zaznati. To je možno le v zadnjih fazah ali v sepsi. Običajno se bolnikova sputum vzame za diagnozo;

Treba je omeniti, da je najbolj natančen rezultat prav zbiranje vsebine bolnikovega želodca. Če sumite na pljučno tuberkulozo, bo kultura sputuma najučinkovitejši način za diagnosticiranje bolezni. Če ima bolnik zunaj pljučnico, v tem biološkem okolju morda ni bakterij. Za določitev tuberkuloze kosti, sklepov itd. Z uporabo PCR je potrebna druga biološka tekočina, na primer, hrbtenična tekočina.

Kako je PCR za tuberkulozo

Kot je bilo opisano prej, je bistvo analize PCR identificirati patogeno DNA v biološki tekočini pacienta s reakcijo polimeraze. Glavne faze metode:

1. Vzorčenje biološkega materiala. PCR ni samo hemotest - raziskana biomasa je lahko slina, urin, cerebrospinalna tekočina, bronhialna tekočina, vsebina želodca, sputum.
2. Po tem je biomasa izpostavljena visokim temperaturam, da bi uničila DNK strukturo patogena.
3. Nato se temperatura postopoma zmanjša in se na uničeni element DNK pritrdi premaz.
4. Glede na rezultate molekularne sinteze, ki traja približno 30 ciklov, se odkrije sev določenega patogenega bakterija ali njegova odsotnost.

Ta analiza zahteva dobro financiranje, zato PCR ne poteka zelo pogosto. Vendar ta metoda nima enakih možnosti, kadar so druge diagnostične možnosti prepovedane ali v nujnih primerih, ko ni časa za čakanje na rezultat.

Povzamemo

Na koncu lahko povzamemo naslednje ugotovitve:

• PCR je zelo natančna analiza, ki lahko odkrije tuberkulozo nekaj dni po okužbi;
• ta analiza se opravi v 3,5 do 5 urah, tako da je v primeru, ko račun gre na uro, nenadomestljiv;
• je varna metoda, ki nima stranskih učinkov;
• Uporablja se, kadar so druge diagnostične metode pokazale nedosledne rezultate ali je njihova uporaba kontraindicirana.

Vendar pa se PCR le redko izvaja, ker je draga analiza, ki zahteva vgradnjo posebne opreme. Poleg tega ni vedno informativen, zato strokovnjaki to metodo odkrivanja tuberkuloze uporabljajo kot dodatno metodo.

PCR analiza (diagnoza) tuberkuloze

Tuberkuloza ali uživanje - ena najbolj priljubljenih nalezljivih bolezni 21. stoletja. Njegovi patogeni so posebne mikrobakterije - kohove palice.

Bolezen se širi ne le na pljuča, temveč tudi na možgane, prebavo, sklepe ali hrbtenico, urinarni sistem in kožo.

Po podatkih Svetovne zdravstvene organizacije 10 milijonov ljudi vsako leto trpi za tuberkulozo, od tega 3 milijone s smrtnim izidom.

Položaj je še posebej žalosten na ozemlju držav Skupnosti neodvisnih držav, tukaj se občasno pojavijo tuberkulozne epidemije. Rusijo, Kazahstan, Ukrajino vodi žalostna ocena o širjenju te okužbe.

Okužba se zlahka prenaša s kapljicami v zraku ali skozi prebavni sistem, prizadene vitalne organe in se lahko hitro prilagodi polimernim zdravilom in kemoterapiji.

Eden od glavnih dejavnikov za uspešno zdravljenje tuberkuloze je pravočasno odkrivanje okužb.

Diagnostične metode

Človeštvo je izumilo veliko metod za prepoznavanje nevarne bolezni. Diagnoza tuberkuloze je razdeljena na instrumentalno in laboratorijsko.

V prvem primeru je treba opraviti krvni test za tuberkulozo, kot tudi sputum, urin.

Druga skupina je študija z uporabo rentgenske in endoskopije. Instrumentalne metode za diagnosticiranje tuberkuloze pa so sevalne in kirurške.

Vrste sevalnih metod za iskanje bolezni

• Fluorografija je metoda diagnosticiranja bolezni, ki jo pozna vsak prebivalec CIS. Z uporabo rentgenskih žarkov pregledamo pljuča in limfne vozle.
• Rentgenska slika prsnega koša - podobna fluorografiji, vendar boljša metoda za odkrivanje okužbe. Sliko dobimo podrobneje in v dveh projekcijah, vendar je ta postopek približno šestkrat dražji. Običajno se uporablja po resnih sumih bolezni.
• Računalniška tomografija se izvaja kot dodatna diagnoza, ki jo uporabljamo tudi za dober razlog za prisotnost okužbe.

Kirurške metode diagnostike vključujejo bronhialno endoskopijo, mediastinoskopijo in torakokoskopijo.

Prva metoda je preučiti bronhialno drevo pljuč s pomočjo "sonde" v tem organu. Preostala dva načina omogočata preučevanje plevralnega dela pljuč s punkcijo prsnega koša.

Vse tri metode so resen kirurški poseg in se najpogosteje uporabljajo v procesu napredovanja bolezni.

Laboratorijski testi vključujejo:

• Analiza sputuma za bacillus tuberkuloze.
• Mikroskopski pregled.
• PCR diagnoza tuberkuloze

Kaj je diagnoza PCR?

Eden od najbolj naprednih metod laboratorijske diagnostike okužb strokovnjaki klic polimerazne verižne reakcije.

To metodo je leta 1983 razvil slavni ameriški znanstvenik Carrie Mullis, za katero je prejel Nobelovo nagrado.

PCR analiza je izolacija DNA delcev iz sputuma, krvi, cerebrospinalne tekočine, iztrebkov itd. za njihovo nadaljnjo biosintezo.

S pomočjo kompleksne molekularne genetske študije se določi narava mikrobov v pacientovem telesu.

Tovrstna analiza za tuberkulozo se izvaja v več fazah: t

• Najprej se vzamejo biološki vzorci. Materiali se namestijo v posebne posode in pošljejo v laboratorij.
• V raziskovalnem središču se analize segrejejo na 97 stopinj. To omogoča uničenje strukture genoma DNA mikroorganizmov, ki je sestavljena iz več verig.
• Temperatura je posebej znižana, tako da se lahko primerji (udeleženci DNA, iz katerih se začne proces biosinteze) povežejo s katerokoli verigo dezoksiribonukleinske kisline.
• Potem se izvede biosinteza molekul, potrebnih za detekcijo.

Po 25-30 ponovljenih ciklih v laboratorijskem raziskovalnem procesu imajo zdravniki možnost, da ugotovijo, ali so infekciozni mikroorganizmi prisotni v bolnikovem telesu ali ne.

Prednosti in slabosti

PCR za tuberkulozo je najsodobnejša diagnostična tehnika. Metoda omogoča odkrivanje okužbe na kateri koli stopnji z visoko zanesljivostjo. Prednosti:

• Hitrost - študija traja največ pet ur. Rezultate testa za tuberkulozne mikrobe najdemo v 24 urah.
• Varnost - PCR metoda nima starostnih kontraindikacij.
• Pravočasnost - ta tehnika vam omogoča odkrivanje tuberkuloze v tistih fazah, ko bolezen nima simptomov.
• Visoka stopnja natančnosti - če je v analizah le nekaj mikroorganizmov, jih bomo našli z verižno reakcijo s polimerazo. Tudi ta tehnika omogoča enostavno identifikacijo povzročitelja tuberkuloze.
• Univerzalnost - diagnostika se uporablja ne le za odkrivanje uživanja, temveč tudi za druge bolezni, kot so klamidija, gonoreja itd.

Kljub številnim prednostim je uporaba te tehnike v domači medicinski praksi prej izjema kot pravilo. Za to obstaja več razlogov.

Slabosti te metode so:

• Visoki stroški raziskave.
• Metoda ni primerna za tiste, ki so se zdravili, ker lahko prisotnost mrtvih bakterij Koch povzroči lažno pozitiven rezultat.
• V primeru mutacije infekcijskih mikroorganizmov, njihovega genoma ni mogoče prepoznati z napačnim sklepom.
• Pomembno je, da izberete pravo okolje za odkrivanje. Na primer, rezultat krvnega testa za PCR za tuberkulozo (vnos za redčenje) bo negativen, če je živčni sistem okužen.
• Te metode ni vedno mogoče uporabiti pri bolnikih, pri katerih je ugotovljena pljučna lezija.

Poleg tega taka analiza za tuberkulozo zahteva sodobno opremo, ki jo 90 odstotkov bolnišnic nima. V CIS lahko takšno analizo izvede mreža klinik Invitro.

Pogoji analize

Priporočila za bolnike, pri katerih se opravi tak test na tuberkulozo, se razlikujejo glede na vrsto analize, ki jo opravijo.

Ko jemanje krvi za PCR, je treba opustiti kajenje uro pred postopkom, za dve uri - za izključitev alkohola in maščobnih živil.

Priporočljivo je tudi, da se vzdržite fizičnih naporov, prav tako je nemogoče vzeti kri za tuberkulozo na prazen želodec.

Pri jemanju brisa iz ust in nosne votline ne morete jesti 2-4 ure pred postopkom, sicer ne bo informativno. Prav tako ne pijte alkohola.

Za natančno analizo je prepovedano kaditi prej kot uro pred postopkom. Na predvečer se vzdržite umivanja zob in uporabe razpršil in razpršil za usta.

Če sumite na tuberkulozo urogenitalnega sistema, mora bolnik 2-3 dni pred porodom izključiti spolni odnos, za 2-3 ure pred postopkom, ne hodite na stranišče na majhen način. Genitalne organe je treba oprati s čisto vodo brez posebnih sredstev.

Ženskam priporočamo, da ne uporabljajo vaginalnih tablet, sveč, žogic in se vzdržijo testiranja na kritičnih dneh.

5 dni pred porodom, je treba prekiniti postopek kolposkopije, kot tudi transvaginalni ultrazvok,

Kdaj se uporablja PCR diagnostika?

Ni vsaka klinika ima tako zapleteno diagnozo, vendar se zdravniki vedno bolj zatekajo k takšnim metodam raziskav. Običajno se taka analiza izvaja v posebnih razmerah.

• V primeru dvomljivih rezultatov manta se lahko uporabi krvni test za tuberkulozo.
• V primerih, ko je bil bolnik v stiku z okuženo osebo, pa zdravnik ne more natančno določiti diagnoze.
• V primeru nujne operacije, ko je treba v kratkem času ugotoviti, ali ima bolnik to okužbo.
• Ko je bolnica noseča, ko druge raziskave niso dovolj varne za novorojenčka.

Opozoriti je treba, da je ta diagnoza priporočljiva za otroke zaradi njene varnosti.

Če ima študent kontraindikacije proti tuberkulinskemu testu, lahko s PCR opravi krvni test za tuberkulozo namesto plašča.

PCR analiza za tuberkulozo

PCR analiza za tuberkulozo je najbolj priljubljena med medicinskimi raziskavami na področju te bolezni.

Toda kako opozoriti sebe in svoje ljubljene na to grozno bolezen? Kako opraviti potrebne teste za PCR?

Simptomi tuberkuloze in njeno preprečevanje

Strokovnjaki pravijo, da okoli 30% celotnega prebivalstva trpi zaradi tuberkuloze.

Največji odstotek bolezni je razvit v nerazvitih državah. To se najpogosteje pojavlja kot posledica zmanjšane imunosti pri ljudeh.

Bolezen je ena najstarejših. To bolezen je mogoče najti v sluznici možganov, v prebavnem traktu, na sklepih in hrbtenici, v urinarnem sistemu in na manjših predelih človeške kože.

Strokovnjaki najlažje določijo prizadeto kožo. Na mestu so majhna tesnila, ki se sčasoma povečajo, izčrpajo z belkasto tekočino.

Povzročitelj tuberkuloze se lahko najpogosteje pobere, ko se pogovarja z bolnikom, kadar kašljajo ali kihajo. Običajno se bolezen nadaljuje brez simptomov ali ima odprto obliko, vendar PCR diagnoza tuberkuloze omogoča odkrivanje v zgodnjih fazah in v nujnih primerih.

Simptomi bolezni: dolgotrajni mokri kašelj, zvišana telesna temperatura, mrzlica, čezmerno znojenje ponoči, ostra izguba teže, občutek utrujenosti in šibkosti.

Najbolj nevarna je odprta oblika bolezni. Oseba, ki trpi zaradi tuberkuloze, lahko okuži zdrave ljudi.

Najpomembnejši simptom pljučne bolezni je hemoptiza. Pojavi se v kateri koli obliki bolezni.

V nekaterih primerih lahko to povzroči krvavitev iz pljuč osebe. To je zelo nevarno in zahteva nujno medicinsko pomoč.

Za preprečevanje in prepoznavanje tuberkuloze strokovnjaki predpisujejo: vzorec - tuberkulinski test, pregled biološkega materiala, fluorografijo, rentgenske žarke in krvni test, sputum ali slino.

Diagnoza bolezni

Izboljšana diagnoza bolezni - to je pravilna in med začetkom zdravljenja. V večini primerov običajne metode odkrivanja patogenov nimajo vedno učinka in so že zastarele.

Najpomembnejši način za identifikacijo in diagnosticiranje pljučne bolezni so zdravniški testi. Običajno uporabljamo PCR diagnostiko. To raziskavo je leta 1983 odkril ameriški biokemik Mullis.

Preizkus pri bolniku s pljučno tuberkulozo se izvaja izključno v posebnih primerih, ko je težko ugotoviti diagnozo ali je nemogoče zaznati bolezen na instrumentalni način.

Polimerazna verižna reakcija je zanesljiva metoda PCR. S to analizo je mogoče določiti povzročitelja, koliko je v krvi, urinu in hrbtenični tekočini. Takšen zdravniški pregled je najvarnejši.

PCR analiza daje 100% rezultat.

Ima visoko občutljivost, ki pomaga prepoznati bolezen prvi čas po okužbi, preden se pojavijo simptomi bolezni. Ta metoda analize daje rezultat v nekaj urah po dobavi biološkega materiala. Setev te analize se opravi trikrat, vendar se aspiracija obolelega želodca izvaja le v bolnišnici.

Za določitev rezultatov smo razvili tri kriterije: visoka natančnost, občutljivost do 90%, specifičnost.

Test za PCR se uporablja v nekaterih primerih:

1. za diagnosticiranje pljučne tuberkuloze;
2. določiti vir bolezni;
3. definicija ekstrakulmonalne lokalizacije;
4. diagnozo ponovitve.

Ocenite rezultat in predpišite pravilno zdravljenje, lahko le specialist. Zelo pomembno je, da se za odkrivanje tuberkuloze določi pravilna shema zdravljenja, zato je treba opraviti test za občutljivost patogena na protibuberkulozne pripomočke.

Različni zdravstveni pregledi za tuberkulozo

Potrebno analizo lahko vzamete na dva načina: vzemite iz krvi ali sline osebo ali vzamete izpljunek.

Krvni testi s PCR so lahko dveh vrst: ELISA in PCR. Takšna študija pomaga spremljati učinkovitost zdravljenja.

ELISA pomaga najti protitelesa v človeškem telesu, ki se upirajo tuberkuloznim mikrobom. Ta študija se izvaja enkrat na dan. Glavna pomanjkljivost je njena majhna občutljivost, ki omogoča določitev le bolezni z nizko stopnjo okužbe.

Najbolj priljubljena in učinkovita raziskava je analiza mikobakterije tuberkuloze. Z njo lahko zdravniki zlahka najdejo DNA bakterij v človeški krvi. Ta metoda se uporablja tudi za določanje števila bakterij, za nadzor zdravljenja bolnika, za odkrivanje zgodnjega ponovnega pojava.

PCR slina je ena najnaprednejših raziskovalnih metod. Takšna analiza bo pomagala identificirati infekcijske bakterije v slini. Z uporabo PCR se poveča število fragmentov DNA škodljivih mikrobov.

Kulturna metoda je namenjena pregledu človeškega izpljunka za odkrivanje mikrobakterij.

Priprava na testiranje PCR

Pozor, potrebujete pravilno pripravo sline za PCR. Če ne upoštevamo vseh predpisov, je lahko analiza napačna.

Pred začetkom testiranja je prepovedano kaditi, jemati hrano in zdravilo ter jemati 12 ur alkohola. Prepovedano je umivanje zob, ne morete uporabiti sredstva za izpiranje, osvežilec ustnic in zobno nitko.

Prepovedano je uporabljati šminko in vstopati v intimne odnose. Dovoljeno je spiranje ust z navadno vrelo vodo;

Ta pregled bo pomagal ugotoviti: herpes, klamidijo, tuberkulozo, patogene pljučnice, onkoviruse, barolleozo, mononukleozo, HIV, hepatitis vseh vrst, rdečke.

Analiza za mikobakterije se v glavnem izvaja v spornih primerih, in sicer, če je težko postaviti diagnozo ali je bil pred začetkom operacije v stiku s pacientom s tuberkulozo, da bi odkrili bolezen. Uporablja se za pregled nosečnice, saj je ta metoda najvarnejša za mater in plod.

Včasih se analiza opravi v zasebni kliniki, ker se pacient ni držal pravil za testiranje, hkrati pa je zaskrbljen zaradi vseh simptomov. Analizo je mogoče izvesti, ko strokovnjaki po opravljenem testu Mantoux niso prepričani ali je bolnik otrok.

Prednosti in slabosti medicinskih preiskav za ugotavljanje tuberkuloze

PCR je najbolj priljubljen in učinkovit način za določanje bolezni.

Njegova največja razlika od drugih študij je hiter in natančen rezultat.

Prednost tega zdravniškega pregleda je, da se lahko izvaja za urološke, ginekološke, onkološke, infekcijske, hematološke, pljučne, gastroenterološke in druge študije.

Glavna prednost takšne medicinske študije je, da so krvne preiskave, sputum in slina pripravljene v kratkem času (za odkrivanje bolezni bo potrebnih 5 ur). Takšen zdravniški pregled omogoča, da se preiskave opravijo, kadar so prepovedane ali nedostopne določene metode preučevanja bolezni. Odlično za odkrivanje ponovitev pri ljudeh.

Zahvaljujoč tej analizi je bilo mogoče izvesti raziskave za vsako biološko okolje. Dovoljeno je jemanje snovi od otrok. PCR omogoča identifikacijo povzročitelja v kateri koli fazi bolezni. Zaradi visoke občutljivosti lahko najdemo tudi mikrobe, čeprav je prisotnih le nekaj bakterij.

Metoda PCR razširi njene zmogljivosti. Uporablja se tudi za določanje očetovstva, za izdelavo novih genov, mutacije, za prečkanje DNA elementov in tako naprej.

Slabosti te študije so draga anketna metoda.

Po zdravljenju lahko krvni test pokaže prisotnost živih ali mrtvih patogenov v majhnih količinah, po opravljenem zdravniškem pregledu pa bo dala pozitiven rezultat.

Bakterije in mikrobi se lahko podvržejo mutaciji, potem pa jih PCR ne bo mogel identificirati in identificirati, zato lahko le specialist predpiše študijo o zahtevanem okolju, sicer bo takšen zdravniški pregled neučinkovit.

Po testiranju je rezultat negativen, vendar to ne izključuje možnosti okužbe osebe s tuberkulozo. Takšen zdravniški pregled se opravi za bolnike s hudo pljučno boleznijo, kadar nobena druga študija ne daje natančnih rezultatov. PCR bo uporaben za ljudi s pljučno in zunajpljučno tuberkulozo.

Žal je medicinska oprema za odkrivanje patogenov tuberkuloze zelo draga.

Javne bolnišnice in klinike si tega ne morejo privoščiti, plačane klinike pa v kratkem času opravijo teste za bolnike in pripravijo že pripravljene rezultate.

PCR diagnoza tuberkuloze

Tuberkuloza je specifična okužba, njen poudarek je lahko v človeških tkivih več let, nato pa se razširi več mesecev. To je kronična bolezen, katere optimalne sheme zdravljenja je težko izbrati. Eden od razlogov za to je pozna diagnoza, ko so se mikobakterije v človeškem telesu že prilagodile številnim zdravilom.

Katere sodobne metode diagnoze obstajajo? PCR diagnostika - kaj je to? Kako poteka ta raziskava? V katerih primerih je tuberkuloza diagnosticirana s to metodo in kaj je njeno bistvo?

Kaj je PCR diagnostika

To je ena od najsodobnejših metod diagnosticiranja ne le bolezni, ampak tudi odkrivanje biološkega materiala. PCR diagnostika je bila odkrita relativno pred kratkim. Pred približno tridesetimi leti, leta 1983, je ameriški biokemik, Carey Banks Mullis, predlagal kompleksno obnovitev biološkega materiala mikroorganizmov v enem kratkem segmentu. Zahvaljujoč njegovemu odkritju je znanstvenik prejel najvišjo nagrado - Nobelovo nagrado.

Kaj je to - PCR diagnosticiranje okužb? Polimerna verižna reakcija (PCR) je diagnoza odkrivanja virusnih bolezni, ki temelji na metodah genskega inženiringa. Široko se uporablja v medicinski mikrobiologiji, imunologiji in virologiji. Metoda je univerzalna in pomaga pri postavitvi diagnoze z majhno količino materiala. Okužbo je mogoče zaznati dobesedno v prvih urah okužbe z njim, še preden se pojavijo prvi simptomi bolezni.

Metoda je sestavljena iz pridobivanja iz materiala bolne osebe ne samega patogena, temveč fragmentov genoma (delcev DNA), njegove biosinteze z naknadnim določanjem, v kateri razred mikroorganizmov spada genski material z molekularno genetskimi metodami.

Kljub temu, da je to zapleten proces, je potrebnih veliko manj časa kot mnogi biološki načini odkrivanja povzročiteljev infekcij. V samo nekaj urah lahko mikroorganizem odkrijemo s PCR. Da bi to dosegli, ga ni treba izolirati od okolja (krvi, cerebrospinalne tekočine, izpljunka) in ga dolgo časa gojiti na umetnih hranilnih medijih. Dovolj je, da je v preučevanem materialu prisoten majhen fragment DNA verige infekcijskega povzročitelja.

Osnova reakcije je možnost, da se pri umetnih pogojih (in vitro) ustvari sinteza molekul nukleinskih kislin infekcijskega povzročitelja.

Kaj je potrebno za PCR?

1. Prajmerji so segmenti DNA, iz katerih se začne biosinteza ali ustvarjanje.
2. Nukleotidi ali kompleksne spojine, ki so osnova molekule DNA ali RNA.
3. Polimerazna verižna reakcija je nemogoča brez prisotnosti polimeraze, ki je encim, ki pospešuje PCR.

Faze diagnostike PCR

Kako se molekularna diagnostika izvede s PCR? Postopek je preprost in traja kratek čas ob upoštevanju zbiranja materiala.

1. Pred začetkom študije vzamejo potrebni biološki material - to je bronhialna pralna voda, kri, želodčna vsebina, sputum. Vrsta biološkega materiala je odvisna od domnevnega patogena.
2. Denaturacija ali uničenje primarne strukture DNA, ki je sestavljena iz dveh verig. Bistvo te faze je ločiti dve verigi pod vplivom visoke temperature (maksimum je 98 ° C, ki traja največ dve minuti).
3. V naslednjem koraku PCR, imenovanem žarjenje, se temperatura zniža za nekaj stopinj, tako da se bo premaz vezal na verigo DNA.
4. Raztezek, med katerim poteka sinteza želenih molekul neposredno.

Posledično samo 25-30 takih ciklov prejme potrebno število kopij DNA mikroorganizmov, ki jih je enostavno prepoznati.

Ali PCR zahteva diagnozo tuberkuloze?

Absolutno vseh oseb s sumom na tuberkulozo ni mogoče izvajati PCR, ker metoda zahteva drago opremo. Vse javne klinike si ne morejo privoščiti. Poleg tega se je zgodilo, da se običajne metode diagnosticiranja okužbe v večini primerov prav tako upravičujejo.

Te vključujejo:

• anketa bolnikov, zgodovina;
• popoln pregled osebe;
• študijo z Mantoux tuberkulinskim testom;
• radiografija ali fluorografija;
• po potrebi računalniška diagnostika;
• mikrobiološke metode raziskovanja: mikroskopija po razmazu in bakteriološka preiskava izpljunka.

PCR za tuberkulozo se izvaja v posebnih primerih, ko je težko postaviti diagnozo ali pa ni mogoče izvesti drugih instrumentalnih metod.

Kljub obilici diagnostičnih metod se pojavnost tuberkuloze še naprej povečuje. Trenutno ni le njena rast, temveč tudi druge značilnosti:

• bolezen se pogosto pojavi v hudi obliki;
• povečuje se število smrtnih primerov;
• vedno bolj odporni na sodobno kemoterapijo so diagnosticirane oblike bolezni.

Nerazumljivost ljudi, da se vsako leto redno zdravniško pregledajo, zavračanje cepljenja vodi do širjenja tuberkuloze. V takih razmerah potrebujemo hitre, informativne in učinkovite raziskovalne metode, ki bi morale biti dostopne otrokom in odraslim. Vse zgoraj navedene diagnostične metode so veliko slabše od PCR.

Koristi diagnosticiranja tuberkuloze s PCR

Ta raziskava, čeprav nova, se je dobro izkazala, zlasti v spornih primerih, kjer ni mogoče postaviti diagnoze iz več razlogov.

Zahvaljujoč PCR je veliko lažje odkriti povzročitelja tuberkuloze v testnem materialu.

Prednosti PCR diagnostike so naslednje.

1. To je hitra analiza. Majhen fragment molekule DNA lahko uporabimo za diagnozo v samo nekaj urah (približno pet), ki se uspešno uporablja v nujnih primerih, ko je na primer pred operacijo potrebno ugotoviti, ali je oseba bolna s tuberkulozo.
2. Analiza PCR je dovoljena v primeru, ko druge metode niso na voljo ali prepovedane (za odkrivanje pljučne tuberkuloze, včasih je potrebno vzeti več radiografskih slik, ki bodo velike doze sevanja).
3. S pomočjo PCR se v vsakem biološkem okolju preveri prisotnost patogena v njem. Na primer, lahko izvedete študijo cerebrospinalne tekočine, če obstaja sum na tuberkulozni meningitis.
4. Dovoljena je PCR diagnoza nalezljivih bolezni pri otrocih, ker je metoda varna.
5. Omogoča identifikacijo patogena na kateri koli stopnji bolezni.
6. Visoka občutljivost PCR omogoča odkrivanje Mycobacterium tuberculosis, čeprav je v biološkem materialu le nekaj mikroorganizmov.
7. Dobro je opraviti diagnozo ponovitve bolezni.

Po vsem prebranem PCR-ju se zdi skoraj popolna diagnostična metoda, ki naj bi vsakdo z sumom na tuberkulozo. Vendar pa obstajajo tudi slabosti, ki jih je treba upoštevati.

Pomanjkljivosti PCR pri diagnozi tuberkuloze

V našem času je takšna diagnostika redkejša od pravilnosti. In za to obstaja razlog.

1. To je draga raziskovalna metoda. V mnogih klinikah je oprema za PCR odsotna zaradi visokih stroškov, vendar je analizo mogoče opraviti v plačanih laboratorijih.
2. Takoj po zdravljenju so lahko v človeškem telesu še vedno prisotne mrtve mikobakterije ali življenje v majhnih količinah (rezultat bo pozitiven med diagnosticiranjem PCR), zato bo metoda v tem času nezanesljiva, ni smiselno, da jo izvajamo.
3. Mutacije mikobakterij povzročajo neučinkovito PCR - normalne sekvence DNA ni mogoče sintetizirati.
4. Treba je izbrati pravo okolje za študijo, kri se vzame le, če obstaja sum, da je okužena (sepsa), ni potrebe po jemanju izpljunka, če obstaja vprašanje tuberkuloze organov živčevja. V tem primeru PCR ne bo mogel odkriti patogena in diagnoza bo neinformativna.

Indikacije za odkrivanje tuberkuloze z analizo PCR

PCR diagnoza tuberkuloze se najpogosteje izvaja v spornih primerih. Kdaj zdravniki napotujejo na to študijo?

1. Če je težko postaviti diagnozo z običajnimi razpoložljivimi metodami, pa je prišlo do stika z bolnikom s tuberkulozo.
2. V primeru, ko oseba ne more biti dostavljena na kliniko, da bi opravila rutinske rutinske teste za tuberkulozo, je lažje pregledati z uporabo PCR, ker se lahko sputum za test prenese v kozarec in diagnoza potrdi v nekaj urah.
3. Če bo oseba opravila nujno operacijo in je nujno ugotoviti, ali je bolan s tuberkulozo.
4. Če je potrebno, je nosečnica bolje preiskati tudi tuberkulozo z uporabo PCR, ker je metoda varna.
5. Vsakdo, ki ni bil diagnosticiran s tuberkulozo, je bil potrjen z bakteriološkimi metodami in fluoroskopijo. To se zgodi, ko je lezija v pljučih neopazna v neposredni podobi, in oseba, ki je med spravljanjem izpljunka za študijo, ne more slediti priporočilom za pravilno zbiranje materiala. V tem primeru je oseba zaskrbljena zaradi vseh simptomov, značilnih za pljučno tuberkulozo.
6. Če obstajajo dvomi o rezultatih testa Mantoux.
7. Pri otrocih je priporočljivo opraviti PCR diagnozo tuberkuloze. Postopek je varen, ne povzroča dodatne izpostavljenosti sevanju in je učinkovit pri odkrivanju težko diagnosticiranih oblik bolezni.

Pravočasna diagnoza tuberkuloze je ključna za pravilno predpisano zdravljenje in zmanjšanje širjenja bolezni. Pogosto znane metode odkrivanja bolezni niso vedno učinkovite. Zato je PCR danes eden najbolj zanesljivih in varnih načinov za odkrivanje okužb v zgodnjih fazah njegovega razvoja.